195523. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hialuronsav frakciók és ilyen terméket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 195 523 2 Ionnal, az epidermális növekedési faktorral (EGF) és egy antibiotikummal, így streptomicinnel vagy gentaniicinnel kombinálva. Mindezek a gyógyszerek közismerten pupillaszűkítő, gyulladásgátíó, gyógyító és antimikrobiális hatást mutatnak. Különösen fontos a hialuronsav szerepének tisztázása a hialuronsav vivőanyaggal kiszerelt streptomicin készítményekben, mert a streptomicin egyike a szemfertőzések kezelésére legelterjedtebben használt antibiotikumoknak. A kísérleti modellek és a végrehajtott kísérletek a következők voltak: 1. a hialuronsav vivőanyaggal kiszerelt polikarpin-nitrát pupillaszűkítő hatása nyulak szemében; 2. a hialuronsavval kiszerelt triamcinolon gyulladásgátló hatása nyulak szemében, dextránnal indukált gyulladásos modellben; 3. a hialuronsavval kiszerelt epidermális növekedési faktor (EGF) sebgyógyító hatása, nyulak szaruhártyájának hámsérülésén vizsgálva; 4. hialuronsav vivőanyaggal kiszerelt streptomicin antimikrobiális hatásának vizsgálata Bacillus subtilis 6633-mal szemben, agar lemezeken. I. A hialuronsavval kiszerelt pilokarpin-nitrát pupillaszűkítő hatása Anyagok A különböző pilokarpin-nitrát készítményekben a pilokarpin vivőanyagaként a következő anyagokat használtuk: — hialuronsav-nátriumsó, Hyalastine frakció (molekulatömeg: kb. 100 000), 10 mg/ml és 20 mg/ml koncentrációban; — hialuronsav-nátriumsó, Hyalectin frakció (molekulatömeg: 500 000-730 000), 10 mg/ml és 20 mg/ml koncentrációban; — 5%-os polivinil-alkohol összehasonlító, a szemészetben szokásosan használt vivőanyagként. A pilokarpin-nitrátból a HA-nátriumsó 10 illetve 20 mg/ml koncentrációjú mennyiségének felhasználásával különböző, szemcseppek vagy gél formájában kiszerelt 2%-os készítményeket állítottunk elő. Közelebbről a következő oldatokat készítettük el: 1. Készítmény — pilokarpin-nitrát (PiN03) 2%-os konyhasós oldata, amely összehasonlítóként szolgál. 2. Készítmény - 5 %-os poli(vinil-alkohol)-lal készült PiN03 oldat (összehasonlító). 3. Készítmény — a Hyalastine frakció nátriumsójával (10 mg/ml) készült PiN03 oldat (2%). 4. Készítmény — a Hyalastine frakció nátriumsójával (20 mg/ml) készült PiN03 oldat (2 %). 5. Készítmény — a Hyalectin frakció nátriumsójával (10 mg/ml) készült PiN03 oldal (2%). 6. Készítmény — a Hyalectin frakció nátriumsójával (20 mg/ml) készült PiN03 oldat (2 %). Módszer A kísérletekhez 2—2,5 kg tömegű albínó űj-zélandi nyulakat. használtunk. A vizsgálni kívánt készítményt mikrofecskendő (10 /rl) segítségével az állatok egyik szemébe juttattuk, míg a másik szei.net kontrollként használtuk. Minden esetben alkalmas időközönként meg mértük a pupilla átmérőjét. Minden oldatot legalább 8 nyülőn vizsgáltunk. Egy-egy szemet legfeljebb három alkalommal kezeltünk, az egyes kezelések között legalább egy hetes nyugalmi időszakot hagyva. Mért paraméterek Különböző időpontokban megmértük a pupilla átmérőket, hogy meghatározzuk a pupillaszűkítő hatás időbeli görbéjét. Ezután a kapott pupilla szűkülés-idő grafikonból a következő, az aktivitásra jellemző paramétereket számoltuk: Imax = a kezelt és az összehasonlító szem pupilla átmérője közötti maximális különbség. Csúcsidő = az az időpont, amikor elérjük az Imnx‘0t- Időtartam — nz az idő, amely a kiindulási állapot visszaadásához szükséges. Plató = az abszolút pupillaszűkítő aktivitás periódusa. AUC = a pupilla szűkítő hatás/időgörbe alatti terület. Eredmények A kísérletek eredményeit az 5. táblázatban foglaltuk össze. A táblázatban a pupillaszűkítő aktivitásidő görbéből a különböző paraméterekre meghatározott számszerű adatok értékeiből látható, hogy a hialuronsav hozzáadása a 2%-os pilokarpin-nitrát oldathoz megnöveli a gyógyszer pupillaszűkítő aktivitását. A gyógyszer biológiai értékesíthetősége 2,7-szer nagyobb lehet a hialuronsav alkalmazása esetén, mint a 2 % pilokarpinnitrátot tartalmazó vizes oldat esetében (1. Készítmény). Meg kell jegyezni, hogy statisztikailag szignifikáns aktivitás növekedés jelentkezik, ha a hialuronsav Hyalectin frakcióját alkalmazzuk vivőanyagként, mind a 10 mg/ml, mind a 20 mg/ml koncentráció esetében (5. és 6 készítmények) összehasonlítva a poli(vinil-alkohol) vivőanyaggal készült pilokarpin-nitrát oldattal (2. készítmény). A hialuronsav vivőanyagként történő felhasználása azért is előnyös, mert a pilokarpin-nitrát pupillaszűkítő aktivitása hosszabb ideig fennáll, ha vivőanyagként ezt az anyagot használjuk. Más szóval, a hialuronsav-tartalmű készítmények esetében a kiindulási pupillaátmérő visszaállásához szükséges idő egészen 190 percig terjed (6. készítmény), míg a konyhasó oldattal készült pilokrirpin-készítmény esetében ez az idő csak 110 perc (1. készítmény). II. A hialuronsav vivőanyaggal készült triamcinolon készítmények gyulladásgátíó hatása Anyagok A kísérletekhez a következő anyagokat használtuk:- a hialuronsav-nátriumsó Hyalectin frakciója (molekulatömeg: 500 000—230 000) 10 mg/ml vizes konyhasó oldat formájában; — triamcolon oldat 10 %-os só-oldat). Módszer A vizsgálatokat átlagosan 1,6 kg súlyú hím űj-zélandi nyulakon végeztük. 5 napos alkalmazkodási időszak 9 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
