195474. lajstromszámú szabadalom • Eljárás N-fenil-benzamid-származékok előállítására
9 195 474 Aj Technika Preparálás: minden alkalmazás előtt frissen készített szuszpenzió Alkalmazás módja: orális, 0,8% metocelben szuszperi dal va Térfogat: 0,01 ml per gramm testsúly és dózis Adagolási rend: naponta 9 napon át, egyéb megjegyzés híján Vizsgált dózisok: napi 60, 120, 180, 240 mg/kg B) A daganatok leírása L 1210/Rij: L 1210 leukémia adaptációja CD2 egérben (C5751 x DBA2, Fi hibrid). Az anyag alkalmazása előtti napon 105 leukémia-sejtet oltunk be intraperitoneálisan. A ketreceket naponta kétszer ellenőrizzük az állatok pusztulása szempontjából. A kísérlet végpontját a dóziskénti 5 egér átlagos túlélése képezi, 10 kezeletlen kontrolihoz viszonyítva. Osteosarcoma C22LR, BCBA egerekben (CB7BL x CBA/'Rij, Fi hibrid). A tumort szubkután oltjuk be az állatok mindkét oldalába. Legalább kétszer hetenként 3 dimenzióban lemérjük a daganatot. A végpont a növekedés retardációja. Ezt mint átlagos időkülönbséget adjuk meg, mely alatt 5—10 tumor térfogata 5 kezelt állatnál elér egy adott értéket, összehasonlítva a keze- Ienlen kontroll állatok 5—10 tumorjával. Ezt az értéket a kezelés elkezdésekor tapasztalat átlagos tumor-térfogat négyszereseként állapítottuk meg. Lewis Lung tumor BCBA egéren. Az eljárás azonos az ostéosarcománál leírttal. A tumor térfogatát itt 800 mm3-ben (= a 3 dimenzióban mért átmérők eredménye) határoztuk meg. C) Eredmények A megválasztott dózisok toxieitása következtében a legtöbb dózis-csoportban nem volt lehetséges a napi alkalmazás. Miután mindegyik csoportban elhullás következett be 120 mg/kg vagy ennél nagyobb dózis kétszeri vagy többszöri alkalmazása után, a túlélő állatoknál csökkentettük az alkalmazások számát. Az észleléseket az alábbi III—V. táblázat mutatja. Értékelés: a vizsgált dózisok túl magasak voltak. Ennek ellenére a vizsgált anyag jelentős aktivitását állapíthattuk meg. L 1210 leukémiánál mérsékelt dózisban, jó aktivitást ostéosarcománál és mérsékelt aktivitást Lewis Lung tumornál. A következő III—V. táblázat az A anyag daganatgátló hatásának vizsgálati eredményeit mutatja egéren: III. táblázat L 1210 leukémia Dózis Átlagos Átlagos túltúlélési élési idő idő, na- növekedése, pókban % Kontrollok (n=10) 8 Kísérleti csoportok 9x60 mg/kg p.o. (n=5) 11 38 7x120 mg/kg p.o. 0=5) 6 tox. halál 4x180 mg/kg p.o. (n=5) 5 tox. halál 4x240 mg/kg p.o. (n=5) 5 tox. halál Dózis Túlélő Tu morn övekeállatok dés retardációja (napok) Kontrollok 0=5) 5/5 _ Kísérleti csoportok 9x60 mg/kg i.p. 0=5) 5/5 7.8 (p=0,0001) 4x120 mg/kg p.o. (n=5) 0/5 (5. toxikus halál nap) 2x 180 mg/kg p.o. (n=5) 1/5 9,6 1x240 mg/kg p.o. (n=5) 5/5 3,1 (p=0,001) V. táblázat Lewis Lung tumor Dózis Túlélő Tumornövekeállatok dés retardációja (napok) Kontrollok Kísérleti csoportok (n=5) 5/5-9x60 mg/kg i.p. 0=5) 5/5 3.8 (p=0,061) 4x120 mg/kg p.o. 0=5) 0/5 toxikus halál 2x180 mg/kg p.o. 0=5) 0/5 toxikus halál 1x240 mg/kg p.o. (n=5) 5/5 3,5 (p=0,018) IV. Az A anyag proliferáció elleni Itatásának vizsgálata pafkányon, helyi alkalmazás esetén A) Technika Kontroll standard: nincs ismert kontroll standard Előállítás: frissen előállítva alkalmazás előtt Alkalmazás módja: helyileg pipettázás útján, 0,5% oldatként abszolút etanolban Térfogat: 1 ml per állat és dózis Vizsgált dózisok: napi 5 mg/állat 14 napig, majd napi 10 mg/állat 10 napig. B) Próba leírása Long Evans törzsű, „fekete csuklyás” fehér szőrű hím patkányokra védő gallért teszünk. 3 cm hosszú és 1,5 cm széles téglalapot jelölünk meg sablon segítségére! a háti bőrön a fekete háti szőrcsík régiójában, borotválás és megtisztítás után. A próbaoldatot lassan csepegtetjük e téglalapra, elkerülve a környező bőrre való lecsurgást. Az oldószert hasonlóképpen alkalmazzuk a kontroll állatokon. 21 napi kezelés után értékeljük a szőr növekedését a kezeit területeken, összehasonlítva a kontroll területekkel. C) Eredmények A kezelt állatoknál a szőrnövés egyértelmű gátlása látható, összehasonlítva a kontroll állatokkal. Értékelés: bár nem zárható ki, hogy az alkalmazott anyag egy része szisztémás úton vett részt a növekedő szőrtüszők gátlásában a lehetséges bőrön keresztüli abszorpció következtében, kimutatható volt, hogy határozott proliferáció elleni hatás érhető el a találmány szerinti anyaggal a bőrfüggelékeken, helyi alkalmazás hatására. N. Az A anyag centrális hatásai A találmány szerinti anyagoknak a központi idegrendszerbe és más zsírdús szervekbe való oehatoló képessége jelentős görcsoldó hatásuk alapján is kimutatható az elektromos ingerléssel kiváltott izomgörcs-pró-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
