195424. lajstromszámú szabadalom • Eljárás L-3,4-dihidroxi-fenil-alfa-metil-alanint tartalmazó gyógyászati oldatok előállítására
3 195 434 4 Akut toxicitás egéren ir. 1. táblázat Vizsgált oldat Dózis, Elhullott/kezelt állatok száma Elhullás ld50 mg/kg Hím Nőstény Összesen 7c mg/kg 2. példa szerinti 3,8%-os oldat 380 0/5 0/5 0/10 0 760 0/5 0/5 0/10 0 1000 0/5 0/5 0/10 0 1240 0/5 0/5 0/10 0 1520 0/5 0/5 0/10 0 1520 felett alfa-metil-DOPA 1%-os oldata 1240 0/5 0/5 0/10 0 fiziológiás sóoldattal 1520 0/5 0/5 0/10 0 1250 felett szignilikanciára jellemző p értékeket. A mért vérnyo- tott átlagot adjuk meg a standard szórással együtt, másértékeknél és a számított változásoknál a számi- A 2. táblázatból kitűnik, hogy a találmány szerinti Vérnyomáscsökkentő hatás patkányon ív. 2. táblázat Mérés közvetlenül a beadás előtt, 0 perc 5 15 30 perccel a beadás után 60 2. példa szerinti oldat Vérnyomás, kPa Vérnyomás változása, kPa P 17,50 ±0,30 16,26 ±0,51 - 1,24 ±0,25 0,05 15,60 ± 0,66 - 1,90 ±0,41 0,05 14,80 ± 0,61 -2,70 ±0,42 0,05 14,26 ± 0,65 - 3,24 ± 0,39 0,05 a-metil-DOPA 1%-os oldada fiziológiás sóoldattal Vérnyomás, kPa Vérnyomás változása, kPa 15,60 ± 1,48 14,93 ±0,86 0,67 ± 1,73 15,23 ± 0,41 0,37 ± 1,34 14,93 ± 0,50 0,67+ 1,37 13,42 ±0,76 2,18 ± 1,69 készítmény a beadást követően 5 perc múlva már jelentősen csökkentette az altatott patkányok vérnyomását, s ez a hatás a vizsgálat 60 perces időtartama alatt stabilizálódott. A vérnyomácsökkenés statisztikailag szignifikáns volt. Megfigyelhető, hogy a vérnyomás csökkenése rövidebb idő alatt bekövetkezik és nagyobb mértékű, mint az összehasonlításul alkalmazott, egyébként nem stabil 1%-os oldatnál. Hasonló mértékű vérnyomáscsökkenést perorális beadás esetén 250 mg/kg' dózisban, azaz a vizsgált ív. dózis 12,5-szeresében hoz létre az alfa-metil-DOPA. A 2. példa szerinti oldat és a fenti összehasonlító oldat adrenerg receptor hatását izolált patkány vas deferensen vizsgáltuk, elektromos ingerléssel. 140—180 g tömegű patkányokból vas deferenst különítettünk el Henderson és munkatársai [Br. J. Pharm., 46 , 764-766 /1972/], valamint Hart és munkatársai [Br. J. Pharm., 66, 361—363 /1979/] módszerével. A szervet 4 ml térfogatú szervedényben felfüggesztve folyamatosan ingereltük Benett és Stockley szerint [Br. J. Pharm., 50, 453 /1974/]. Az ingerléshez használt áramimpulzusok jellemzői a következők voltak: 50 V feszültség, 0,1 Hz frekvencia, 1 ms időtartam. Amikor az elektromos ingerlésre bekövetkezett összehúzódások nagysága már nem változott, kumulativ dózis-hatás görbét vettünk fel a 2. példa szerinti oldat, illetve az V/ alfa-metil-DOPA-t tartalmazó, fiziológiás sóoldattal frissen készült oldattal. Az adagolást közvetlenül megelőző kontrakció nagyságái alapul véve, kiszámítottuk a gátlás mértékét és meghatároztuk az 5 077-os gátlást biztosító konccntrációértcket (IC50). A kétféle vizsgált oldatra kapott IC50-értékeket a 3. táblázatban tüntetjük fel. 3. táblázat Vizsgált oldat ICS0 mol/liter 2. példa szerinti 3,8%-os oldat alfa-metil-DOPE 1%-os oldata 2,81 . 10'2 fiziológiás sóoldattal 3,87 . 10'2 A 3. táblázat adataiból kitűnik, hogy a találmány szerinti oldat kisebb koncentrációban biztosítja ugyanazt a hatást, mint az összehasonlításul használt, fiziológiás sóoldattal készült oldat. Vizsgáltuk az 1. példa szerint készített oldat stabilitását 25 ± 2 °C hőmérsékleten fehér üvegben 90 napig történő tárolás során. A vizsgálat kezdetén, majd meghatározott időközökben mértük az oldat kémhatását és fajlagos forgatóképességét, kiértékeltük az oldat színét és vékony-rétegkromatográfiás analízist is végeztünk. Ez utóbbihoz Kieselgel GF2S4 réteget (gyártó: Merck) használtunk, a vizsgált oldatból 5 pl menynyiséget cseppentettünk rá, s oldószerként 60 tf% n-butanolból, 15 tf% jégecetből és 25 tf% vízből álló elegyet alkalmaztunk. Az oldatszint, a fajlagos forgatóképességet és a kémhatást a VI. Magyar Gyógyszerkönyv előírásai szerint határoztuk meg közvetlen beméréssel. A kapott eredményeket a 4. táblázat tartalmazza. A 4. táblázatból világosan kitűnik, hogy az 1. példa szerinti oldat a 90 napos tárolás során nem változott. A találmány szerint előállított gyógyászati oldatok megfelelő stabilitással rendelkeznek. Jó felszívódásuk 45 50 55 60 65 3
