195250. lajstromszámú szabadalom • Eljárás triciklusos makrolidok előállítására
195250 mentálást kétköbméteres fermentorban végezzük, oltás előtt a táptalajt 120°C-on 30 percig sterilezzük. A fermentálás 4 napon át 30°C hőmérsékleten folytatjuk. A fermentlevet 25 kg diatómaföld segítségével megszűrjük. A micéliumot 500 liter acetonnal extrahálva 500 liter extraktumhoz jutunk. A mícélium extraktumát és a fermentlé 1350 liter térfogatú szúr létét egyesítjük és átvisszük 100 liter, nem ionos adszorbciós Diaion HP-20 (Mitsubishi Chemical Industries Ltd.) gyantából készült oszlopon. Miután az oszlopot 300 liter vízzel és 300 liter 50%-os vízzel acetonnal mostuk, 75% acetonnal eluálunk. Az eluátumot csökkentett nyomáson bepároljuk, amíg 300 liter vizes oldathoz jutunk. Ezt a maradékot háromszor 20 liter etil-acetáttal extraháljuk. Az etil-acetátos extraktumot csökkentett nyomáson olajos maradékig pároljuk. A maradékot kétszeres tömegmennyiségű savas szilikagéllel keverjük el (speciális szilikagél-12; Fuji Devison Co. készítmény), és a keverékből etil-acetáttal pépet készítünk. Miután az oldószert elpároltuk, a nyert száraz port 8 liter azonos savas szilikagélből készült oszlopra visszük, amit n-hexánban készítünk el. Az oszlopot 30 liter n-hexánnal, 30 liter n-hexán/etil-acetát 4:1 (térf.) eleggyel és 30 liter etil-acetáttal eluáljuk. A kívánt anyagot tartalmazó frakciókat egyesítjük, és csökkentett nyomáson olajos maradékig pároljuk. Az olajos maradékot kétszeres tömegmennyiségű savas szilikagéllel elkeverjük, és a keverékből éti 1- -acetáttai pépet készítünk. Miután az oldószert elpároltuk, a kapott száraz port újból kromatografáljuk 3,5 liter savas szilikagél n-hexánban készült oszlopán. Az oszlopot 10 liter n-hexánnal, 10 liter n-hexán/etíl-acetát 4:1 (térf.) eleggyel és 10 liter etil-acetáttal eluáljuk. A kívánt vegyületet tartalmazó frakciókat egyesítjük, és csökkentett nyomáson sárgás olajig pároljuk. Az olajos maradékot n-hexán/etil-acetáí 1:1 (téri.) elegyében oldjuk, és 2 liter szilikagélből (Merck; szita lyukbőség: 0,070—0,037 mm) ugyanezen oldószerelegyben készült oszlopra visszük. Az eluálást 10 liter n-hexán/etil-acetát 1:1 (térf.), 6 liter n-hexán/etil-acetát 1:2 (térf.) eleggyel és 6 liter etil-acetáttal végezzük. Az FR-900506 vegyületet tartalmazó frakciókat egyesítjük, és csökkentett nyomáson bepárolva, 34 g FR-900506 vegyületet nyerünk fehér por alakjában. Ezt a fehér port acetonitrilben oldjuk, és csökkentett nyomáson betöményítjük. A betöményített oldatot egy éjszakán át 5°C hőmérsékleten tartjuk, 22,7 g prizmás kristályokat nyerve. Az anyagot acetonitrilben átkristályosítva 13,6 g tisztított FR-900506 vegyületet kapunk színtelen prizmák alakjában. Az FR-900525 vegyületet tartalmazó frakciókat ugyancsak egyesítve, és csökkentett nyomáson bepárolva, 314 mg FR-900525 anyagot kapunk sárgás por alakjában. 33 18 3. példa 500 ml Erlenmeyer lombikok mindegyike 160 ml alábbi összetételű táptalajt öntünk: 1% glicerin, 1% kukoricakeményítő, 0,5% glükóz, 1% gyapottmagliszt, 0,5% szárított élesztő, 0,5% kukorica lekvár és 0,2% kálcium-karbonát, pH=6,5-re beállítva. Í20°C hőmérsékleten sterilizálunk 30 percen át. Az egyes lombikokat kacsnyi Streptomyces tsukubaensis 9993 törzzsel oltjuk be ferde agaros tenyészetről. 30°C hőmérsékleten tenyésztünk 4 napon át körkörös rázógépen. Tíz lombik tartalmával oltunk be 150 liter alábbi összetételű, 200 literes fermentorban levő táptalajt: 5%oldható keményítő, 0,5% földimogyoróliszt 0,5% szárított élesztő, 0,5% sikérlíszt, 0,1% kálcium-karbonát és 0,1% Adekanol (habzágátló; Asasi Denka Co.). A táptalajt előzőleg 120°C hőmérsékleten sterilizáljuk 20 percen át. A fermentálást 30°C hőmérsékleten végezzük 4 napon keresztül, a tenyészetet percenként 250 fordulatszámmal keverve, és levegőztetéshez percenként 150 liter levegőt használva. A kapott fermentlevet 5 kg diatómafölddel leszűrjük. A kiszűrt micéliumot 50 liter acetonnal extraháljuk. Az 50 liter acetonos extraktumot a fermentlé leszűrésénél kapott 135 liter szuriette! egyesítjük és 10 liter, nem ionos Diaion HP-20 (Mitsubishi Chemical Industries Ltd.) adszorpciós gyantából készült oszlopon engedjük át. Az oszlopot 30 liter vízzel, 30 liter 50%-os vizes acetonnal mossuk és 75%os vizes acetonnal eluálunk. A 30 liter eluátumoí csökkentett nyomáson 2 liter vizes maradékig pároljuk. A vizes maradékot háromszor 2 liter etil-acetáttal extraháljuk. Az etií-acetátos extraktumot csökkentett nyomáson olajos maradékig pároljuk. A maradékot kétszeres tömegmennyiségű savas szilikagéllel (speciális szilikagél-12; Fuji Devison Co. gyártmány) elkeverjük és a keverékből etil-acetátban pépet készítünk. Az oldószert elpárolva, a nyert száraz port 800 ml, ugyanilyen savas szilikagélből n-hexánban készült oszlopra visszük. Az oszlopot 3 liter n-hexánnal, 3 liter n-hexán/etil-acetát 4:1 (térf.) eleggyel és 3 liter etil-acetáttal eluáljuk. A kívánt anyagot tartalmazó frakciókat egyesítjük, és csökkentett nyomáson olajos maradékig pároljuk. Az olajos maradékot 30 ml n-hexán/etil-acetát 1:1 elegyben oldjuk, és szilikagélen (Merck, szita lyukbőség 0,070— 0,037 mm) kromatografáljuk. Az oszlopot ugyanebben az oldószerelegyben készítjük el 500 mi szilikagélből. Az eluálást 2 liter n-hexán/etil-acetát 1:1 (térf.) eleggyel, 1,5 liter n-hexán/etil-acetát 1:2 eleggyel és 1,5 liter etil-acetáttal végezzük. Az FR-900506 vegyületet tartalmazó frakciókat egyesítjük, és csökkentett nyomáson bepárolva, 3 g FR-900506 vegyületet nyerünk sárgás por alakjában. Az FR-900525 vegyületet tartalmazó frakciókat egyesítjük, és csökkentett nyomáson olajos maradékig pároljuk. Az olajos mara34 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
