195234. lajstromszámú szabadalom • Eljárás luteinizáló hormont felszabadító hormont antagonizáló hatású nonapeptid és dekapeptid hormonanalógok és e vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
195234 port eltávolítását például metilén-kloridos tirfluor-ecetsav-oldat, dioxános hidrogén-klorid-oldat, ecetsavas hidrogén-klorid-oldat, vagy más erős savoldat jelenlétében, előnyösen 50%-os diklór-metános trifluor-ecetsav-oldattal végezzük, szobahőmérsékleten. Minden védett aminosavat előnyösen körülbelül 2,5 mólos feleslegben használunk, és a kapcsolódást diklór-metánban, diklór-metán-dimetil-formamid elegyben, dimetil-formamidban vagy hasonló oldószerben végezzük, előnyösen metilén-kloridot használunk, szobahőmérsékleten. A kapcsolásra használt szer rendszerint DCC diklór-metánban, de használhatunk N,N’-diizopropil-karbodiimidet (DIC) vagy más karbodiimidet is, önmagában, vagy HBT, N-hidroxi-szukcinimid, más N-hidroxi-imid vagy oxim jelenlétében. Másik eljárás szerint védett aminosav aktív észtereket (például p-nitro-fenil-, pentafluor-fenil-észtert vagy hasonló vegyületet) vagy szimmetrikus anhidrideket is használhatunk. A szilárd fázisú szintézis befejeztével a minden funkciós csoportján védett poli - pepiidet eltávolítjuk a gyantáról. Ha a polipeptidet benzilészter-típusú kötéssel van a gyantához kapcsolva, a kötés hasítását prolin C-terminálisú peptidek esetén alkil-aminnal vagy fluor-alkil-aminnal végzett aminolízissel, vagy C-terminálisként glicint tartalmazó peptidek esetén ammónia-metanol vagy ammónia-etanol eleggyel végzett aminolízissel, 10 és 50°C közötti hőmérsékleten, előnyösen 25°C-on, 12—24 órán át, előnyösen 18 órás kezeléssel végezzük. A peptidet például metanollal végzett átészterezéssel, majd aminolízissel is lehasíthatjuk a gyantáról. Az eljárásnak ebben a szakaszában a védett peptidet szilikagélen kromatografálva tisztíthatjuk. Az oldalláncot védő csoportokat ú^y távolítjuk el a pepiidről, hogy az aminolízissel kapott terméket például vízmentes,cseppfolyós hidrogén-flouriddal kezeljük anizol vagy egyéb, karbónium eltávolítására alkalmas vegyület jelenlétében, vagy hidrogén-fluorid-piridin komplexszel, illetve bór-tris(trifluor-acetát)-tál és trifluorecetsavval kezeljük, vagy szénhordozós vagy polivinil-pirrolidon-hordozós palládium katalizátor jelenlétében hidrogénnel redukáljuk, vagy nátriummal redukáljuk cseppfolyós ammóniában, előnyösen cseppfolyós hidrogén-fluoriddal kezeljük anizolban, —10 és 10°C közötti hőmérsékleten, előnyösen 0°C-on a reakcióidő 15 perc és 1 óra között változhat, előnyösen 30 perc körül van. A C-terminálisként glicint tartalmazó peptideket benzhidril-amin típusú gyantáról úgy távolítjuk el, hogy a hasítást és a védőcsoport eltávolítást egyetlen lépésben hajtjuk végre, cseppfolyós hidrogén-fluoridos kezeléssel, anizol jelenlétében, a fentebb leírtak szerint. Az összes védőcsoport eltávolítása után kapott peptidet ezután több egymást követő kromatográfiás lépésben tisztítjuk, a következő 13 kromatográfiás eljárások -segítségével: ioncserélő kromatográfia, enyhén bázikus, acetátformában lévő gyantán; hidrofób adszorpciós kromatográfia helyettesítőtől mentes polisztirol--divinil-benzol (példul Amberlite XAD) gyantán; szilikagél adszorpciós kromatográfia; ioncserélő kromatográfia karboximetil-cellulózon; megoszlásos kromatográfia, például Sephadex G-25-ön, vagy ellenáramú megoszlással; nagynyomású folyadék-kromatográfia (HPLC), különösen fordított fázisú HPLC, oktil- vagy oktadecil-szilil-szilikagél kötött fázis oszloptöltettel. Ha az 1-, 2-, 3- vagy 6-os helyzetbe racém formában lévő aminosavat vittünk be, a diasztereomer nonapeptid vagy dekapeptid végterméket elválasztjuk, és a kívánt, megfelelő helyzetben D-aminosavat tartalmazó peptidet elválasztjuk és tisztítjuk, előnyösen a fentebb felsorolt kromatográfiás eljárásokkal. A C-terminális végen aza-glicinamidot tartalmazó peptidek előállítását előnyösen a hagyományos, oldat fázisban végrehajtott peptidszintézissel végezzük, ismert peptid köztitermékek felhasználásával. Ezt az eljárást részletesen a 3. példában ismertetjük. A fentiek szerint a találmány értelmében úgy állítjuk elő az (I) általános képletű peptideket és gyógyászatilag elfogadható savaddíciós sóikat, hogy az adott esetben szilárd hordozókhoz kötött, (i) általános képletű vegyületnek megfelelő védett polipeptidről eltávolítjuk a védőcsoportokat és adott esetben a kovalensen kötött,szilárd hordozót; vagy az (I) általános képletű vegyületnek megfelelő két fragmenst a megfelelő sorrendben összekapcsoljuk; és kívánt esetben, a) egy (I) általános képletű vegyületet gyógyászatilag elfogadható savaddíciós sóvá alakítunk; vagy b) egy (I) általános képletű vegyület valamely savaddíciós sóját gyógyászatilag elfogadható savaddíciós sóvá alakítjuk. Megjegyezzük, hogy a guanidino-helyettesített vízoldható amínosavak, melyek a találmány szerinti eljárásban a 6-os helyzetben lévő glicint helyettesíthetik, igen fontos köztitermékek, és ennek következtében a találmány lényeges részét képezik. Előnyösek azok a (II) általnos képletű köztitermékek, amelyek képletében n értéke 4, R, jelentése 1-6 szénatomos alkilcsoport —, és Rj jelentése 1-6 szénatomos alkilcsoport. A fenti (II) általános képletű köztitermékeket ismert eljárásokkal állíthatjuk elő, például úgy, hogy a megfelelő amint guanilezzük vagy amidáljuk. A találmány szerinti eljárást az alábbi példákkal kívánjuk megvilágítani, a korlátozás széndéka nélkül. 14 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
