195234. lajstromszámú szabadalom • Eljárás luteinizáló hormont felszabadító hormont antagonizáló hatású nonapeptid és dekapeptid hormonanalógok és e vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
195234 N-Ac-D-Nal (2) -D-p-F-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Dhh-Leu-Arg-Pro-NHEt, N-Ac-D-Nal (2)-D-p-F-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Prh-Leu-Arg-Pro-NHEt, N-Ac-D-Nal (2)- D-p-F-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Hha-Leu-Arg-Pro-NHEt, és N-Ac-D-Nal (2)-D-p-F-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-DDpa-Leu-Arg-Pro-NHEt. A fentebb leírt hasítás során az etil-amint sztöchiometrikus mennyiségű metil-aminnal, illetve propil-aminnal helyettesítve a fentebb felsorolt nonapeptidek metil-amidjait, illetve propil-amidjait állítjuk elő. 3. példa Azokat az (I) általános képletű vegyületeket, amelyek képletében H jelentése -NH-CONH képletű csoport, a hagyományos, oldatban lefolytatott szintézissel állítjuk elő. Az (5) képletű szabad peptid vagy só előállítására példaként az 1. reakcióvázlat szerinti eljárást ismertetjük. Az AzaGlyNH2 ebben az esetben -NH-NH-CONH2 csoportot jelent. Az egyes fragmenseket például acil-azidos módszerrel [Honzel J. és munkatársai Coll. Czecz. Chem. Comm. 26, 2333 (1971)], DCC/HBT kapcsolással vagy egyéb más, racemizációt nem okozó kapcsolási eljárással kapcsolhatjuk össze. A (2) képletű vegyület ismert (Dutta A.S. és munkatársai J. Chem. Soc. Perkin I. 379. oldal (1979)), és az (1) képletű vegyület az 1. példában ismertetett eljárással állítható elő. A (3) képletű vegyületet a (2) képletű vegyületből állíthatjuk elő, a Cbz- és nitrocsoport hidrogenolízisével, majd D-Boc-N,N’-guanidino-dietil-D-homorgininnel kapcsolva, DCC/HBT vagy egyéb ismert kondenzálószer jelenlétében (lásd Dutta és munkatársai fentebb idézett eljárását, hasonló LHRH-analógok előállítására). Az 1. reakcióvázlat szerinti eljárás termékeként N-Ac-D-Nal (2) D-p-Cl-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Deh-Leu-Arg^Pro-Aza-GlyNHjj-t kapunk acetátsó formájában, olvadáspontja 153—155°C; [a]£° = -29,6° (c = 0,3, ecetsav); aminosav analízis: Ser 0,9 (1); Pro 1,1 (1); Leu 1,0 (1); Tyr 0,98 (1); Trp 0,9 (1); D-Nal(2) 1,0 (1); Arg 1,0 (I); p-CI-Phe 1,0(1) D-Deh 1,0 (1); NH? 1,3 (1). A fenti módon összekapcsolt fragmensek peptidek vagy aminosavak lehetnek. Az N-terminális nonapeptid savat szilárd fázisú vagy oldatban végzett eljárással is előállíthatjuk, és azt követően kapcsoljuk a szemikarbazid-hidrogén-kloridhoz, diciklohexil-karbodiimid-hidroxi-benzo-triazolos vagy egyéb kapcsolási eljárással. 4. példa A) 0,1 g N-Ac-L-Pro-D-p-F-Phe-Trp-Ser-Tyr-D-Dia-Leu-Arg-Pro-GlyNH2—hidrogén-fluoridot — előállítása az 1. példa szerint történt — 50 ml vízben oldunk, és 50 g, előzőleg ecetsavval ekvilibrált és vízzel mosott Dowex 3 anioncserélő gyantával töltött osz23 lopon átfolyatjuk. Az oszlopot ionmentes vízzel eluáljuk és az eluátumot liofilezzük. N-Ac-L-Pro-D-p-F-Phe-Trp-Ser-Tyr-D-Dia-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2-ecetsav-sót kapunk, [a]p5 = 15,4° (c = 1, ecetsav). A fenti eljárást ismételve, de az ioncserélő gyantát ecetsav helyett más savval — például hidrogén-kloriddal, hidrogén-bromiddal^ kénsavval, foszforsavval, salétromsavval, benzoesavval vagy egyéb hasonló savval — ekvilibrálva, a megfelelő sókat állítjuk elő. Hasonló eljárással állíthatók elő a találmány szerinti eljárással előállított egyéb- LHRH-analógok savaddíciós sói is. A hidrogén-klorid-sókat például az alábbi módon állítjuk elő. 300 mg N-Ac-D-Nal(2)-D-p-Cl-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Deh-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2 -hidrogén-fluoridot 150 ml ionmentes vízben oldunk és előzőleg 2 n sósavoldattal ekvilibrált Biograd Ag-3 (gyengén bázikus) ioncserélő gyantával töltött 1 x 10 cm-es oszlopra visszük. Az oszlopon áthaladt folyadékot visszavezetjük az oszlopra, és 150 ml ionmentes vízzel eluáljuk. Az eluátumot ionmentes vízből háromszor liofilizáljuk. 210 mg N-Ac-D-Nal (2) -D-p-CI-Phe-D-Trp-Ser-Tyr- D-Deh-Leu-Arg-Pro-D-Alá-NH2—hidrogén-kloridot kapunk, [oc]p5 = — 11,9° (c = 1, ecetsav), olvadáspontja 166—170°C. C) Savaddíciós só előállítása szabad pepiidből 50 mg szabad bázis formában lévő N-Ac-L-Pro-D-p-F-Phe-D-Nal (2) -Ser-Tyr-D-Dia-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 oldatához 30 ml 1 n ecetsavat adunk. A kapott oldatot liofilezve 50 mg fenti pepiidet kapunk ecetsavas só formájában. [a]p = —15,4° (c = 0,5, ecetsav). Hasonló módon eljárva, de az ecetsav helyett más savakat használva — a pepiidhez viszonyítva sztöchiometrikusan egyenértékű mennyiségben — állíthatjuk elő a megfelelő savaddíciós sókat, például hidrogén-klorid-, hidrogén-bromid-, kénsavas, foszforsavas vagy salétromsavas sókat. 5. példa 50 mg N-Ac-L-Pro-D-p-F-Phe-D-Nal (2) - -Ser-Tyr-D-Dih-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2—ecetsav-só 25 ml vízzel készült oldatát 50 g Dowex 1 (erősen bázikus, kvaterner ammonium anioncserélő gyanta) gyantával töltött oszlopra visszük, az oszlopot előzőleg nátrium-hidroxiddal ekvilibrálva hidroxilion formába alakítjuk. Az oszlopot 150 ml vízzel eluáljuk és az eluátumot liofilezzük. 45 mg megfelelő polipeptidet kapunk, szabad bázis formájában. Hasonló módon eljárva, a találmány szerinti eljárással előállított egyéb peptidek savaddíciós sóit is — például a 6. példában említetteket — a megfelelő szabad bázissá alakíthatjuk. 24 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 13
