195234. lajstromszámú szabadalom • Eljárás luteinizáló hormont felszabadító hormont antagonizáló hatású nonapeptid és dekapeptid hormonanalógok és e vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására

195234

N-Ac-Nal (2) -D-p-F-Phe-D-Nal (2) -Ser-Tyr-D-Dph-Leu-Arg-Pro-GlyNH2,

N-Ac-Nal (2)-D-p-F-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Dhh-Leu-Arg-Pro-GlyNH2,

N-Ac-Nal (2) - D-p-F-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Prh-Leu-Arg-Pro-GlyNH2,

N-Ac-Nal (2) -D-p-F-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Hha-Leu-Arg-Pro-GlyNH2,

N-Ac-Nal (2) -D-p-CI-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Dph-Leu-Arg-Pro-GlyNH2,

N-Ac-Nal (2) -D-p-Cl-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Dmh-Leu-Arg-Pro-GlyNFI2,

N-Ac-Nal (2) - D-p-CI-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D--Deh-Leu-Arg-Pro-GlyNH2, és

N-Ac-Nal (2) -D-p-Cl-Phe-Trp-Ser-Tyr-D-dhh-Leu-Arg-Pro-GlyNH2,

Flasonló módon, de a Boc-Gly-O-gyanta helyett Boc-D-Ala-benzhidril-aminopolisztirol-1 %-divinilbenzo! gyantát használva — melyet benzhidril-amino-polisztirol-1 % divinilbenzol gyantából (Beckman Inst), Boc-D-Ala-OH-ból, DIC-ből és HBT-ból állítottunk, elő — az alábbi megfelelő D-Alai0-LHRH-analógokat állítjuk elő:

N-Ac-D-p-Cl-Phe-D-p-Cl-Phe-D-Nal (2)-Ser-Tyr-D-Iph-Leu-Arg-D-AlaNH2,

N-Ac-D-p-Cl-Phe-D-p-Cl-Phe-D-Trp-Ser-Tyr- D-Dih-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2, N-Ac-D-p-Cl-Phe-D-p-Cl-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-- D-Dmh-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2, N-Ac-D-p-Cl-Phe-D-p-Cl-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Deh-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2, N-Ac-D-p-Cl-Phe-D-p-Cl-Phe-D-T rp-Ser-Tyr-D-Dhh-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2, N-Ac-D-p-Cl-Phe-D-p-Cl-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Dia-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2,

N-Ac-D-Nal (2) -D-p-CI-Phe-d-Trp-Ser-Tyr-D-Deh-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2, [<x]D25=—21,6° (C=0,4 ecetsav),

N-Ac-D-Nal (2)-D-p-Cl-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Deh-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2,

N-Ac-D-Nal (2) -D-p-Cl-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Dmh-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2,

N-Ac-D-Nal (2) - D-p-Cl-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Dhi-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2,

N-Ac-D-Nal (2) -D-p-Cl-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Dph-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2,

N-Ac-D-Nal (2) -D-p-F-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Deh-Leu-arg-Pro-D-AlaNH2, olvadáspontja 160—165°C, [a]p° = —26,0° (c= 1,0, ecetsav) Aminosavanalízis:

Ser, 0,9 (1); Pro, 1,0 (1); D-Ala, 1,0 (1); Leu, 1,0 (1);

Tyr, 1,0 (1); Trp, 0,9 (1); Arg, 1,0 (î); p-F-Phe-, 0,9 (1);

D-Deh 0,9 (1); D-Nal(2), 0,9 (1); NH3,

U (1),

N-Ac-D-Nal (2) -D-p-F-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Dmh-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2.

2. példa

A C-terminális végen Pro-NHCH2CH3 csoportot tartalmazó analógok előállítását az 1. példában ismertetett szintézis programm szerint végezzük. A Beckman 990 szintetizátor reakcióedénybe 2,13 g Boc-Pro-O-gyan-21

12

tát viszünk, melyet szilárd Boc-Pro-OH-cézium-só és klór-metil-polisztirol-1 % divinil-benzol (Láb Systems, Inc.) ekvimoláris mennyiségeinek reagáltatásával állítunk elő. A fenti mennyiségű Boc-Pro - O - gyanta

1.4 mmól prolint tartalmaz.

A gyantát egymás utáni lépésekben 2,0—

2.5 moláris feleslegben lévő, védett aminosavakkal és DCC-vel kapcsoljuk. A fentieknek megfelelően a gyantát az egymást követő kapcsolási ciklusokban az alábbi aminosavakkal reagáltatjuk:

1,62 g Boc-Arg(tozil)-OH,

0,93 g Boc-Leu-OH.H20,

0,94 g Boc-N,N’-guanidino-diizopropil-hoarginin,

0,49 g 1-hidroxi-benzo-triazol,

1,75 g N-Boc-O-2-bróm-benzil-oxi-karbonil-L-triozin és

1,11 g Boc-Ser(benzil)-OH.

A szintézisnek ezen a pontján a védett polipeptidet tartalmazó gyantát két részre osztjuk, és az egyik részt reagáltatjuk tovább egymást követő lépésekben az alábbi aminosavakkal:

0,57 g Boc-D-Nal (2) -OH,

0,48 g Boc-D-p-F-Phe-OH,

0,21 g N-Ac-L-prolin.

A gyantát eltávolítjuk a reakcióedényből, diklór-metánnal mossuk és vákuumban szárítjuk. 2,26 g védett peptidgyantát kapunk.

A védett polipeptidet 25 ml etil-aminnal 18 órán át 2°C-on végzett aminolízissel hasítjuk le a gyantáról. Az etil-amint hagyjuk elpárologni, és a gyantát metanollal extraháljuk. A metanolt elpárologtatva 1,39 g N-Ac-L-Pro-D-p-F-Phe-Trp-Ser (benzil) -Tyr(2,6-diklór-benzil) -D-Dih-Leu-Arg(tozil)-Pro-NHCH2CH3 peptidet kapunk. A védett pepiidet 3 ml anizollal és 30 ml (CoF3-ból) újradesztillált vízmentes, cseppfolyós hidrogén-fluoriddal 0°C-on 30 percen át keverjük, Kel-F reakcióedényben. A hidrogén-fluoridot vákuumban ledesztilláljuk és a maradékot éterrel mossuk. A maradékot 2 mól/1 ecetsavban oldjuk és liofilezzük. 0,82 g nyers N-Ac-L-Pro-D-p-F-Phe-Trp-Ser-Tyr-D-Dih-Leu-Arg-Pro-NHCH2CH3 peptidet kapunk, ecetsavas só formájában. A végső tisztítást nagynyomású folyadék-kromatográfiás eljárással végezzük, 20 mg anyagot

2.5 x 100 mm-es, 40—50 mikronos oktadecil-szililezett szilikagél (Merck, Lichroprep C18) töltettel ellátott oszlopon tisztítunk.

A fentiekkel azonos módon eljárva, de a megfelelő helyen a megfelelő védett aminosavat adagolva állítjuk elő az alábbi vegyületeket:

N-Ac-D-Nal (2) -D-p-F-Phe-D-Trp-Ser-D-Dih-Leu-Arg-Pro-NHEt,

N-Ac-D-Nal (2) -D-p-F-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Dph-Leu-Arg-Pro-NHEt,

N-Ac-D-Nal (2) -D-p-F-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Dmh-Leu-Arg-Pro-NHEt,

N-Ac-D-Nal (2) -D-p-F-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Deh-Leu-Arg-Pro-NHEt,

22

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65