195206. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új 7-hidroxi-indol-származékok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
195206 Módosított Ungerstedt-módszer (Acta Phy. siói. Scand., 82. suppl. 367—369 93 (1971)) szerint 220 g körüli tömegű hím patkányok nigrastriális dopaminergikus kötegét megsértjük 9,2 pg 6-hidroxi-dopamin-hidrokloridnak 4 p,l, 0,5 mg/ml aszkorbinsavat tartalmazó fiziológiás oldatban történő egyoldalú injektálásával. A vizsgálni kívánt vegyületeket intraperitoneálisan adjuk be. Átlagban 6—6 kezelt állatot egyenként olyan rotométerben helyezünk el, amely lehetővé teszi minden egyes állatnak a sértett oldallal ellentétes irányban végrehajtott fordulatai megszámlálását. Mindegyik kísérletet legalább másfél órán át folytatjuk. A kísérlet körülményei között a következő eredményeket kapjuk: A 3. példa szerinti termék 5 mg/kg dózisban történő beadásának eredményeképpen gyakorlatilag egyáltalán nem figyelhető meg forgás. Ez a vegyület tehát lényegében mentes a dopaminergikus stimuláló hatástól a központi idegrendszer szintjén. 2) Sztereotip viselkedés A vizsgálatokat 5—5, 150—180 g tömegű hím patkányokból álló csoportokon végezzük. Mindegyik állatot külön-külön néhány faforgácsot tartalmazó, 29 • 25 • 17 cm méretű rácsos ketrecben helyezünk el. A vizsgálni kívánt vegyiiletet intraperitoneálisan adjuk be. Az állatok viselkedését félóránként feljegyezzük 5 órán át, és Halliwell és társai által Brit. J. Pharmacol., 23.330—350. (1964) szakirodalmi helyen ismertetett módon értékeljük. Ha az állat alszik, ez az érték 0, ha ébren van, de mozdulatlan, az érték 1, ha forog a ketrecben, az érték 2, ha szaglássza a ketrec padlóját, az érték 3, ha nyalogatja a falakat, az érték 4, ha fogaival a faforgácsokat vagy a ketrec rudazatát megérinti, az érték 5, ha üti a faforgácsokat vagy a ketrec rudazatát, akkor az érték 6. Az összértéket a csoportok átlagából határozzuk meg, mely átlagot a vizsgált vegyület beadása után különböző időpontokban vett értékekből számoljuk. A 3. példa szerinti vegyület 50 mg/kg dózisban gyakorlatilag nem okoz sztereotip mozgásokat. Ez a vegyület tehát lényegében mentes dopaminergikus agonista hatástól a központi idegrendszer szintjén. 3) A vérnyomáscsökkentő hatás vizsgálata A vérnyomáscsökkentő hatást Wistar-törzsbeli, 300 g körüli tömegű hím patkányokon tanulmányozzuk, amelyeket 50 mg/kg dózisban intraperitoneálisan beadott Nembutal-lal érzéstelenítünk. A kísérleti vegyületet intravénásán a nyaki vénába adjuk be. A karotid artériás nyomást a vizsgált vegyület beadása előtt és után mérjük. 1 mg/kg dózisban a 3. példa szerinti termék az artériás nyomás enyhe csökkenését okozza. 11 4) Direkt értágító hatás (vagy vaszkuláris relaxáló posztszinaptikus hatás) vizsggálata Spargue-Dawley törzsbeli, 320—350 g tömegű patkányokat 50 mg/kg dózisú intraperitoneális injekció útján Pentobarbital-lal érzéstelenítünk. Miután az artériás nyomás mérésére szánt karotid katétert és a vizsgálni kívánt vegyületek és lehetséges anta'gonistáik injektálására szánt nyaki katétert elhelyeztük, az állatok agyvelejét acélrúddal eltávolítjuk. Az acélrudat a jobboldali szetnüregnyíláson vezetjük be, a gerincvelő szintje alá. Az állatokat ezután azonnal mesterséges lélegeztetjük. Az artériális vérnyomás stabilizálódása után néhány perccel az állatoknak intravénás perfúzió formájában 50 pg/kg/perc dózisban angiotenzin II anyagot adunk, miáltal az átlagos vérnyomás mintegy 100 mmHg-rel nő. Miután a vérnyomás stabilizálódott, a vizsgálni kívánt vegyületet intravénás úton minden két percben és kumulált dózisban beadjuk. Az átlagos artériás vérnyomásban így kapott százalékos csökkenések lehetővé teszik dózisválaszgörbe felrajzolását, amely így a vizsgált vegyület értágító hatására jellemző. Az állatoknak előzetesen különböző antagonistákkal való kezelése lehetővé teszi ezen vegyületek vonatkozásában a hatásmechanizmus megállapítását. A kísérleti vegyületeket 0,001 mg/kg és 1 mg/kg közötti dózisban vizsgáljuk. Antagonistaként Domperidone-t és Propanolol-t használunk. Megállapítható, hogy a 3. példa szerinti terméknek 0,001 mg/kg dózistól kezdődően dózisfüggő értágító hatása van és ez a hatás dopaminergikus és alfa-adrenergikus eredetű. 5) Elaltatott patkányon a pozitív inotróp hatás vizsgálata Spargue-Dawley törzsbeli, 300—350 g súlyú patkányokat elaltatunk 50 mg/kg dózisú intraperitoneális injekció formájában beadott Pentobarbital-lal. A baloldali szívkamrában katétert helyezünk el, hogy mérhessük a szívbeli intraventrikuláris nyomást és a dP/dt VG értékét (vagyis az intraventrikuláris nyomás változásának a sebességét). A combi artériába bevezetett második artériális katéter lehetővé teszi a szisztémikus artériás nyomás és a szívfrekvencia észlelését. A vizsgálni kívánt vegyületeket és az esetlegesen alkalmazott antagonistákat a nyaki vénába helyezett katéteren át injektáljuk. Ez a modell lehetővé teszi a különböző anyagok által in vivo a szívösszehúzódásra kifejtett hatás tanulmányozását, a dózis és a beadás időpontja függvényében. A pozitív inotróp hatású anyagok növelik a dP/dt értékét, a maximális kamrabeli nyomást valamint a differenciális nyomást. A 3. példa szerinti termék 10—100 pg/kg dózisban növeli a dP/dt értékét és a maximális kamrabeli nyomást, amelyet egyébként a Propanolol nem gátol. A 3. példa szerinti termék tehát pozitív inotróp hatású. 12 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
