195190. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 4(5)-helyettesített imidazol-származékok előállítására
195190 A minták radioaktivitását egy folyadék-szcintillációs spektrométerrel mérjük, és a %-os gátló hatást úgy számítjuk ki, hogy az eredményeket összehasonlítjuk az inhibitor nélkül kezelt kontrollminták megfelelő értékeivel. A gátló hatás jellemzésére a gátló anyagnak azt a — mikromólban kifejezett — koncentrációját használjuk, amely az enzim aktivitását 50%-kal csökkenti (EC50), 0,1 pmóios szubsztrát- (androsztén-dion) -koncentráció mellett. Néhány (I) általános képletü vegyület EC50 értékét az I. táblázatban adjuk meg. I. Táblázat Aromatáz enzim gátlása patkány petefészek mikroszómás meghatározásban 5 Példa száma ECsox 1 <0,05 2 <0,05 3 <0,05 X = A vizsgált vegyület jjnralban kifejezett azon koncentrációja, amely az aromatáz enzim hatását 50%-kal csökkenti, 0,1 yimólos szubsztrát-koncentráció mellett. Az előző kísérletet megismételtük, összehasonlító anyagként az alábbi vegyületeket alkalmazva: 3. példa szerinti vegyület; a,oc-bisz (2-metil-fenil) -1 H-imidazol-2-metanol: a 2 101 114 sz. nagy-britanniai szabadalmi leírás 2. példája szerinti, egyik leghatékonyabb vegyület; (jele x) a-(2,4 -diklór-fenil) -1 -metil-a-fenil-1 H-imidazol-4-metanol: 4 213 994 sz. egyesült államokbeli szabadalmi leírás 5. példája szerinti vegyület; (jele y) a,a-bisz (4-klór-fenil) -1 H-imidazol-2-metanol: 4 152 441 sz. egyesült államokbeli szabadalmi leírás IIIB példája szerinti vegyület (jele z). A kontroll vegyületek tisztasága, fizikai állandóik alapján, megegyezett a megfelelő szabadalmi leírásokban megadottakkal. Az összehasonlító vizsgálatok eredménye az alábbi: II. Táblázat Hatóanyag ec50x 3. példa 0,028 X 1 ,075 y 5 Z 5 x = laisd I. táblázat Látható tehát, hogy a találmány szerinti vegyületek aktivitása (figyelembevéve az I. táblázatot is) minimálisan 38-szorosa az eddig ismertetett vegyületekének. A jelen találmány szerinti vegyületek gátolni képesek az aromatáz enzimet, és ezáltal emlősökben gátolni képesek az ösztrogének szintézisét. A találmány szerinti vegyületek e tulajdonságuknál fogva az ösztrogénektől függő betegségek, például az emlőrák kezelésére alkalmasak. E hatásukat az alábbi in vivo vizsgálattal mutatjuk ki. Az ösztrogén-szintézis gátlásának kimutatása patkányokon 45—55 g testtömegű, éretlen nőstény Wistar patkányokat 4—5 állatból álló kontrollcsoportokra és kísérleti csoportokra osztunk. A vizsgálandó vegyületeket 7 napon át, minden nap gyomorszondán keresztül, kukoricaolajban oldva adjuk be. A kontroll állatoknak a vizsgálandó vegyületet nem tartalmazó kukoricaolajat adunk. A vizsgálat 4. napjától kezdődően a vizsgálandó vegyületekkel kezelt összes állatnak, továbbá a kontroll állatok felének szubkután (bőr alá adott) injekció formájában 1,0 mg tesztoszteron-propionátot adunk kukoricaolajban oldva. A többi kontrol! állat csak ugyanilyen mennyiségű kukoricaolajat kap. A vizsgálat 7. napján a tesztoszteron-propionátta! kezelt patkányoknak szubkután injekció formájában 3,7 MBq (3H)-tesztoszteront adunk, 50 pl oldószer elegyben, amely oldószer elegy fiziológiás nátrium-klorid oldat és etanol 3:1 térfogatarányú elegye. 2 órával később az állatokat lefejezzük, méhüket eltávolítjuk, és a külső kötőszövetektől megtisztítva tömegüket lemérjük. Amint ezt az alábbi, II. táblázatban összefoglaltuk, a kukoricaolajjal kezelt állatok méhének tömege kicsi, ezek az értékek a nemstimulált vagy negatív kontrollértékek. A tesztoszteron-propionáttal kezelt kontroll állatokban az aroma*izálás útján keletkezett ösztrogének stimulálják (serkentik) a méh növekedését, és így ezen állatok méhének tömege nagyobb. Az aromatizálást gátló vegyületek hatására az ezen vegyületekkel kezelt állatok méhének tömege szignifikánsan kisebb, mint a tesztoszteronnal kezelt kontroll állatoké. A [3H]-tesztoszteronnal kezelt patkányok petefészkét eltávolítjuk, a szerveket megtisztítjuk a külső szövetektől, és 2,5 ml olyan 1,0 mmólos kálium-foszfát-pufferrel (pH = 6,5) homogenizáljuk, amely 3,0 mmól magnézium-klcrid-hexahidrátot, 320 mmól szacharózt és 0,25% Triton X-100-at polietilén-glikol-(p-izookti 1-fenil) -éter, Rohm and Haas] is tartalmaz A petefészek szteroidjait toluol és etanol 9:1 térfogatarányú, olyan elegyével kivonatoljuk, amelyhez 0,25—100 mg jelzetlen ösztradiolf, ösztriolt és ösztront, továbbá körülbelül 16,7 Bq aktivitású ( 14C)-ösztradiolt adunk. Utána a mintákat homogenizáljuk, 500 x g gyorsulással 10 percig centrifugáljuk, és a 6 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
