195181. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fluor-allil-amin-származékok előállítására

195181

elegyet egy. éjszakán át keverjük. Éteres extrahálások, majd szilikagéles kromatográfia után színtelen olaj formájában 180 mg védett N-metil származékot kapunk. Ezt az olajat sósavas éterben feloldjuk, ezután színtelen tűs kristályok formájában megkapjuk az N-metil (Z)-2-(2’,4’-diklór - fenoxi)metil-3-fluor-allil-amint. Olvadáspontja: 154°C.

8. példa

MAO bénítás: in vitro vizsgálat

A) Az (I) általános képletű vegyületek MAO bénító képességét in vitro A. Christmas és társai (Br. J. Pharmacol, 45, 490 (1972)) módszerével határoztuk meg, patkány agy-13

ból származó részlegesen tisztított mitochondriumokban, 14c p-tiramint használva szubsztrátumként. Egy vegyület MAO bénító aktivitását az IC50 értékkel fejeztük ki, amely 5 azt a mólkoncentrációt jelenti, ami az enzim 50%-os bénításához szükséges. Néhány (I) általános képletű vegyületre vonatkozóan, a fenti módszerrel meghatározott IC50 értékeket az I. táblázat tartalmazza, összehason- 10 lításul megadjuk a klorgilinre, L-deprenilre és pargilinre vonatkozó IC50 értékeket is. Az

I. táblázat adatai nem mutatnak szelektivitást MAO-A vagy MAO-B bénítás szempontjából, mivel a 14c p-tiramin mindkét enzimforma szubsztrátuma.

14

I. táblázat

MAO bénítás aktivitás - in vitro

Vegyület /a/

IC5 g/mólokban/

(Z) — 2— (2’ ^’-diklo7]:-fenoxi(metil-3--fluor-allil-amin

1 ,5 x

10~7

(Z)-2-fenoxi-metil-3-fluor-allil-amin

1 X

10~6

(Z)-2-tiofenoxi-metil-3-fluor-allil-amin

1 X

10~6

klorgilin

1 X

10~8

L-deprenil

1 X

10~7

pargilin

/a/ sósavas so formájában

2 x

10 _6

Az I. táblázat adatai azt mutatják, hogy a vizsgált vegyületek hatásos MAO bénítok.

B) Az (I) általános képletű vegyületeket olyan szempontból is megvizsgálhatjuk, hogy a MAO bénítás idő függő kinetika szerint megy végbe, vagy nem. A vizsgálatot az alábbi módszerrel végezzük:

Patkány agy mitochondriumokat készítünk foszfát pufferben (0,1 M, pH=7,2) való homogenizálással, majd differenciál centrifugálásnak vetjük alá. A mitochondriumokat ugyanebben a pufferben szuszpendáljuk, a vizsgálandó vegyületet hozzáadjuk a kívánt koncentrációban és a rendszert inkubáljuk. Különböző intervallumokban alikvot mennyiségeket kiveszünk és mérjük a MAO bénító aktivitást 14c p-tiramin (kevert szubsztrátum) szubsztrátum felhasználásával. (Lásd A. Christmas és társai, fentebb). Amikor (Z)-2- (2’,4’-diklór-fenoxi)- metil-3-fluor-allil - -amint vizsgáltunk a fent említett módszerrel, a MAO bénító hatás az inkubációs idő függvényében növekedett. A kezdeti aktivitáscsökkenés után az inhibitorkoncentráció növelésével az aktivitás nőtt. A MAO bénítás irreverzibilisnek bizonyult, mivel 24 órás foszfát pufferes dialízis után nem tért vissza az enzimaktivitás.

C) Az (I) általános képletű vegyületek szelektivitását a MAO-A és MAO-B tekinte- 45 tében úgy határozhatjuk meg, hogy megismételjük a B részben leírt eljárást és a MAO aktivitást 14c s-hidroxi-triptamin (a MAO-A előnyös szubsztrátuma) és 14c fenetil-triptamin (a MAO-B előnyös szubsztrátuma) 50 szubsztrátumok alkalmazásával mérjük. A szelektivitást a MAO-B-vel szembeni bénító aktivitás és a MAO-A-val szembeni bénító aktivitás közti aránnyal fejezzük ki. (Z)-2-(2’,4’-diklór-fenoxi) -metil-3-fluor-allil-amin eseté- 55 ben ez az arány 200, vagyis a vegyület 200- szor szelektívebben gátolja a MAO-B-t mint a MAO-A-t. Más vegyületek egyenértékű vagy jobb szelektivitást mutatnak, ahogy az a II. táblázatban látható.

8