194938. lajstromszámú szabadalom • Eljárás javított nukleinsav-reagensek előállítására
b2, hibridizálódnak. Ugyanakkor a vektorból származó nukleinsav részek távolsága a hibridizáló kapcsolódási pontoktól (1) csökken (1. ábra) és a hibrid stabilabb, mint az a hibrid, amely egy reagens párral képződik (vagyis a technika állása szerinti módszerrel), amint ezt a 2. ábra bemutatja, ahol ez a hibrid azonos méretű, mint a nukleinsav-fragmensek sorozatának teljes területe. Az egy reagens-párból képződött hibrid vektorból származó részei könnyen törnek, pl. mechanikai feszítésre, pl. rázásra. Ilyen esetben a már hibridhez kötött jelzés elszabadul. Mivel a találmány szerinti javított nukleinsav-reagensek érzékenyebbek, mint a korábban alkalmazott nukleinsav reagensek, ezek alkalmasak a kromoszomális átrendeződések és öröklődési betegségek kimutatására. A találmány jellemzőit az igénypontok megkülönböztető vonásaiban mutatjuk be, és a találmányt nagyobb részletességgel mutatjuk be az ez után következő leírásban és a mellékelt ábrákban, amelyekben az 1. ábra mutatja be a szendvics-hibridek egy sorozatát; a 2. ábra ábrázol jegy technika eddigi állása szerinti szendvics-hibridet; a 3. ábra mutatja be nukleinsav-fragmensek két váltakozó szériájának helyeit egy olyan nukleinsavban, amelyet a találmány szerinti nukleinsav-reagensek sorozata készítéséhez választottunk ki; a 4. ábra mutatja be nukleinsav-fragmensek sorozata három váltakozó szériájának megfelelő helyeit; az 5. ábra a 3. ábra szerinti nukleinsav-fragmensek egy sorozatát mutatja be külön (a), egymással egyesítve (b) és mind külön, mind egymással egyesítve (c); a 6. ábra mutatja be szendvics-hibridek egy sorozatát, amelyen belül a 6a. ábra olyan szendvics-hibridek egy sorozatát mutatja be, amely akkor képződik, amikor elkülönített fragmenseket alkalmazunk, a 6b. ábra olyan szendvics-hibridek egy sorozatát mutatja be, amely akkor keletkezik, amikor egyesített b-fragmenseket alkalmazunk, és a 6c. ábra olyan szendvics-hibridek egy sorozatát mutatja be, amely akkor keletkezik, amikor mind elkülönített, mind egyesített b-fragmenseket alkalmazunk; a 7. ábra olyan nukleinsav-reagensek egy sorozatát mutatja be, amely különböző nukleinsavakat azonosít; a 8. ábra olyan szendvics-hibridek egy sorozatát mutatja be, amely akkor keletkezik, amikor a 7. ábra szerinti különböző nukleinsavakat azonosító nukleinsav-reagensek egy sorozatát alkalmazzuk; a 9. ábra közvetlen hibridizálási módszerrel képzett hibridek egy sorozatát mutatja be; a 10. ábra a pKTH 1220 rekombináns plazmidot mutatja be; a 11 ábra olyan szendvics-hibridek egy sorozatát mutatja be, amelyek akkor képződnek, 3 amikor a pKTH 1220 rekombináns plazmidból készült nukleinsav-fragmensek egy sorozatát alkalmazzuk; a 12. ábra a pKTH 1271 rekombináns plazmidot mutatja be; és a 13. ábra olyan szendvics-hibridek egy sorozatát mutatja be, amelyek akkor képződnek, amikor a pKTH 1271 rekombináns plazmidból készült nukleinsav-fragmensek egy sorozatát alkalmazzuk. Találmányunk nukleinsav-fragmensek sorozatából álló nukleinsav-reagensekre vonatkozik. A nukleinsav-reagenseknek ezek a sorozatai legalább két, de előnyösen több váltakozó nukleinsav-fragmenst tartalmaznak akár 20 fragmensig is, amelyek egy vagy több, az azonosítandó nukleinsavra megfelelően homolog nukleinsavból származnak. Ezáltal a nukleinsav fragmensek váltakozó sorozatainak legalább két szériáját nyerjük, amelyek nem szabad, hogy egymással homológok legyenek. A nukleinsav-reagensek sorozatát elő lehet állítani szintetikusan. Ebben az esetben a nukleinsav-fragmensek sorozatainak két váltakozó szériájából származó fragmensek nem szabad, hogy homológok legyenek egymással. Ezeknek azonban megfelelően homológoknak kell lenniök az azonosítandó nukleinsavakban levő váltakozó helyekre. Ezeket a fragmenseket könnyen elő lehet állítani teljesen automatizált berendezésekkel az azonos’tandó nukleinsav-szekvenciájának jellemzése után. A találmány szerinti nukleinsav-reagensek nukleinsav-fragmensek elkülönített vagy egyesített, vagy mind elkülönített, mind egyes tett sorozatából vannak összeállítva. A nukleinsav-fragmensek sorozatait lehet egy vektorra egyesíteni, vagy ezek tartalmazhatják vektorok részeit, vagy teljesen mentesek lehetnek vektor-részektől. Az alkalmazott nukleinsav-fragmenseknek minimális hossza 15 nukleotid. A hosszban nincs tényleges felső határ, de előnyös olyan fragmenseket alkalmazni, amelyek hoszsza 20—5000 nukleotid. A találmány szerinti nukleinsav-fragmensek vagy az azonosítandó genomból származnak, vagy a genom egy részéből, pl. egy viszonylag nagy, a genom egy bizonyos részét képviselő klónból. A találmány szerinti nukleinsav-fragmensek sorozitait így számos független genom területből khet készíteni, amelyek nem közvetlenül szomszédosak egymással. Az így készített nukleirsav-fragmens sorozatokat egyesítjük és azonos reagenshez alkalmazzuk. Nukleinsav-fragmensek sorozatát lehet izolálni olyan DNS-ből is, amely nem azonos a meghatározandó nukkinsavval, de kielégítően homológ arra, úgyhogy stabil hibrid képződik a reagens és az azonosítandó nukleinsav között. A nukleinsa\-fragmensek megfelelő sorozatának készítése kétségtelenül a megfelelő nukleinsav fragmensek izolálására korlátozódik a genom-4 3 194938 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
