194913. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a 6-os helyzetben aromás amino-karbonsavat tartalmazó új gonadoliberin-származékok és e vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására

194913

nal 8-ra állítjuk, az oldatot hagyjuk felmelegedni, majd 20°C-on 48 órán át keverjük, miközben pH-ját TEA-nal 8 körüli értéken tartjuk. A dimetil-formamidot vákuumban eltávolítjuk, a maradékot 50 ml etil-acetátban oldjuk, és háromszor 20 ml 10%-os citromsavval, háromszor 20 ml vízzel, háromszor 20 ml telített nátrium-hidrogén-karbonáttal, végül 20 ml telített nátrium-kloriddal mossuk. Az etil-acetátos fázist vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk, szűrjük, és vákuumban bepároljuk. A visszamaradó olajat éterrel eldörzsöljük, a szilárd anyagot szűrjük.

Termelés: 1,05 g (77,8%)

R^=0,90; Rf=0,91 ; R'f°=0,96

f) Boc-Aa-Leu-Arg-Pro-NHEt

Molekulasúly: 630,74

1,0 g (1,5 mmol) Boc-Aa-Leu-Arg(N02)-Pro-NHEt tetrapeptidet oldunk 50 ml 50%-os ecetsavban, és 400 mg.10%-os palládiumos csontszén katalizátor jelenlétében hidrogénezzük 4 órán keresztül. A katalizátort kiszűrjük, az oldatot bepároljuk, és a maradékot éterrel eldörzsöljük.

Termelés:. 779 mg (82,5%)

R|=0,45

g) H-Aa-Leu-Arg-Pro-NHEt.(TFA)2

Molekulasúly: 724,67 630 mg (1 mmol) Boc-Aa-Leu-Arg-Pro-NHEt tetrapeptidet oldunk 5 ml trifluor-ecetsavban, majd szobahőmérsékleten 20 percig keverjük. A TFA-t vákuumban gyorsan eltávolítjuk, majd a maradékot éterrel elporítjuk, szűrjük és szárítjuk.

Termelés: 648,5 mg (89,5%)

R^=0,34; R|=0,76

h) Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Aa-Leu-Arg-Pro-NHEt.CHgCOOH

Molekulasúly: 1276,54 358 mg (0,5 mmol) az 1. példa g) lépésében előállított Glp-His-Trp-Ser-Tyr-N2H3 pentapeptidet oldunk 10 ml dimetil-formamidban, -10°C-ra hűtjük, és keverés közben 0,34 ml 6 n sósavat, majd 37,7 mg nátrium-nitrit tömény,vizes oldatát csepegtetjük hozzá 5 perc elteltével hozzáadjuk 362,3 mg (0,5 mmol) H-Aa-Leu-Arg-Pro-NHEt. (TFA) 2 tetrapeptid 1 ml dimetil-formamidban, 0,34 ml trietil-amin jelenlétében, készült -10°C-os oldatát. A reakcióelegyet 1 órán át -5°C-on, 1 órán át 0°C-on keverjük, majd hagyjuk szobahőmérsékletre felmelegedni. A dimetil-formamidot vákuurtiban eltávolítjuk, a maradékot Sephadex G-25 oszlopon (2 X 95 cm) 0,2 n ecetsav oldatban kromatografáljuk. A megfelelő frakciókat összegyűjtjük és liofilizáljuk. Termelés: 365,7 mg (57,3%)

R|*-0,65; R|=0,49; R?=0,69 Aminosav-analizis: Ser 0,87; Glu 0,99;

Pro 1,02;

Leu 1,00; Tyr 0,97;

His 1,03;

Trp0,82; Aa 0,91;

Arg 1,01

11

3. példa

[Mab6] -gonadoliberin előállítása

a) Boc-meta-amino-benzoesav (Boc-Mab)

Molekulasúly: 237,25

1.0 g (7,5 mmol) m-amino-benzoesavat feloldunk 10 ml dimetil-formamidban, az oldat pH-ját trietil-aminnal 8-ra állítjuk, majd hozzáadunk 2,5 g terc.-butiloxi-karbonátot. Szobahőmérsékleten egy napig keverjük. A reakcióelegyet az 1. példa k) lépésében ismertetett eljárás szerint dolgozunk fel.

Termelés: 1,4 g (80,9%)

Op. 92°C

R|°=0,88; R;o=0,84

b) Boc-Mab-Leu-Arg(N02)-Pro-Gly-NH2

Molekulasúly: 704,78

1,5 g (2,5 mmol) H-Leu-Arg(NOa)-Pro-Gly-NH2-trifluor-acetát sót (N. Yanaihara et al., J. Med. Chem. 16, 373 1973)) oldunk 10 ml dimetil-formamidban, 0°C-ra hűtjük, és az oldat pH-ját TEA-nal 8-ra állítjuk. Ezután az oldathoz adunk 383 mg (2,5 mmol) N-hidroxi-benztriazolt és 515 mg (2,5 mmol) DCC-t. Ezt követően lassan az oldathoz csepegtetjük 593 mg (2,5 mmol) Boc-Mab 3 ml DMF- ban készült oldatát. A reakcióelegyet 48 órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd a kivált DCU-t kiszűrjük és az oldatot vákuumban bepároljuk. A visszamaradó olajat feloldjuk 30 ml etil-acetátban, és háromszor 10 ml 10%os citromsavval, háromszor 10 ml vízzel, háromszor 10 ml telített nátrium-hidrogén-karbonáttal, végül 10 ml telített nátrium-kloriddal mossuk. Az etil-acetátos fázist nátrium-szulfáton szárítjuk, majd vákuumban bepároljuk. Az olajos maradékot éterrel eldörzsöljük, a kivált fehér kristályos anyagot szűrjük, éterrel mossuk:

Termelés: 1,2 g (68%)

Op. 132-133°C Rf=0,43

c) Boc-Mab-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2

Molekulasúly: 659,78

1.0 g (1,5 mmol) Boc-Mab-Leu-Arg(N02)-Pro-Gly-NH2 pentapeptidről a 2. példa f) lépésben leírtakkal megegyező módon távolítjuk el a védőcsoportot.

Termelés: 775 mg (78,3%)

Rj?=0,52

d) H-Mab-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2.(TFA2)

Molekulasúly: 753,72

670 mg (1 mmol) Boc-Mab-Leu-Arg-Pro- Gly-NH2 pentapeptid-amidot feloldunk 5 ml trifluor-ecetsavban, majd szobahőmérsékleten 20 percig keverjük. A TFA-t vákuumban eltávolítjuk, a visszamaradó olajat éterrel elporítjuk, szűrjük és szárítjuk.

Termelés: 689 mg (91,5%)

Rj=0,50; R^=0,53; R^O.42

e) Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Mab-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2

Molekulasúly: 1244,39

358 mg (0,5 mmol) az 1. példa g) lépésé-12

7

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65