194913. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a 6-os helyzetben aromás amino-karbonsavat tartalmazó új gonadoliberin-származékok és e vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1949i3 elválást 280 nm-nél mért UV elnyeléssel és TLC-va-1 követjük. A megfelelő frakciókat öszszegyüjtjük és liofilizáljuk. Termelés: 315 mg (52%) R|=0,58; Rí=0,83; R|=0,72 Aminosav-analízis: Ser 0,91; Gin 2,03; Pro 0,95; Leu 1,00; Tyr 1,10; His 1,02; Trp 0,81; Aa 0,95 2. példa [Aa6, desGly10]-gonadoliberin etil-amid előállítása a) Z-Arg(N02)-Pro-NHEt-acetát Molekulasúly: 465,47 3,24 g (22,8 mmol) prolin-etil-amidot feloldunk 70 ml tetrahidrofuránban. Az oldathoz adunk 7,33 g (20,7 mmol) Z-Arg(N02)-OH-t és 1,034 g N-hidroxi-benztriazolt. A reakcióelegyet jeges vízfürdőben hűtjük, és keverés közben 5,34 g (25,9 mmol) diciklohexil-karbodiimid 50 ml tetrahidrofuránban készült oldatát adagoljuk hozzá. A reakcióelegyet jéghűtés mellett 5 órán át, májd további 20 órán át szobahőmérsékleten keverjük, ezután szűrjük és tetrahidrofuránnal mossuk. A szűrletet vákuumban bepároljuk, a maradékot kloroformban feloldjuk. A kloroformos oldatot háromszor 35 ml 1:5 arányú ammónium-hidroxid — víz eleggyel, kétszer 20 ml vízzel, majd háromszor 35 ml n sósav oldattal, végül kétszer 20 ml vízzel extraháljuk. A kloroformos részt vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk, szűrjük, kloroformmal mossuk, majd a kloroformos oldatot bepároljuk. A viszszamaradó anyagot 35 ml THF és 50 ml etil-acetát elegyében oldjuk, szűrjük, és 30 ml 1:2 arányú THF-etil-acetát eleggyel mossuk. Az oldat bepárlása után a visszamaradó,szilárd habhoz 100 ml dietil-étert adunk. Szűrjük, éterrel mossuk és vákuumban szárítjuk. Termelés: 9,69 g (98%) OP. 125°C [a]zo= -42,5° (c=l, metanol) R|=0,5; RfZ=0,72 b) Z-Leu-Arg(N02)-Pro-NHEt Molekulasúly: 578,65 5,6 g (11,73 mmol) Z-Arg(N02)-Pro-NHEt védett dipeptid-etil-amidot feloldunk 30 ml jégecetben. Az oldathoz 55 ml 4 n jégecetes hidrogén-bromid oldatot adunk. A reakcióelegyet másfél órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Az oldathoz 250 ml absz. étert adunk, majd az elegyet 1 órán át állni hagyjuk. A kivált anyagról a felülúszót dekantáljuk, és a maradékot 100 ml étert adunk. 15 perc állás után szűrjük, és éterrel bőven mossuk. A hidroszkópos, szilárd anyagot vákuumban foszfor-pentoxid és nátrium-hidroxid jelenlétében szárított. A kissé higroszkópos anyag súlya: 6,44 g. A fenti dipeptid-etil-amid-hidrogén-bromidból 6,04 g-ot (11,0 mmol) szuszpendálunk 150 ml kloroformban. A szuszpenzióhoz 5,5 ml trietil-amint adunk. A szuszpenzió lassan oldódik, a teljes feloldódás érdekében további 9 6 2,5 ml TEA-t adunk hozzá. Ezután 6,4 g Z-Leu-OPCP 65 ml kloroformban készült oldatát csurgatjuk a reakcióelegybe, és éjszakán át keverjük. A reakcióelegyet 1 n sósav-oldattal, telített nátrium-klorid oldattal, majd 2 n ammónium-hidroxid oldattal, végül ismét telített nátrium-klorid oldattal extraháljuk. A kloroformos oldatot vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot éterrel eldolgozzuk. A szilárd anyagot szűrjük, éterrel mossuk és vákuumban szárítjuk. A nyerstermék súlya: 5,5 g (84,6%) A fenti védett tripeptid-etil-amidot 30 ml etil-acetátban enyhe melegítéssel feloldjuk. Aktív szénnel derítjük, kétszer 10 ml etil-acetáttal átmossuk. A szűrlethez részletekben 75 ml dietil-étert adunk. A kiváló, olajos anyag gyorsan megszilárdul. Mintegy 2 óra állás után szűrjük, etil-acetát és éter (2:3) elegygyel, majd éterrel mossuk, és vákuumban szárítjuk. Termelés: 4,7 g (74,3%) Op. 116-118°C [a]|°=57,0° (c= 1, metanol) R?=0,74; Rf=0,49 c) H - Leu-A r g ( N02 ) - Pro- N H Et. H Br Molekulasúly: 537,4 1,18 g (2 mmol) Z-Leu-Arg(N02)-Pro-NHEt tripeptidet oldunk 10 ml jégecetes hidrogén-bromid oldatban, majd 1 órán át szobahőmérsékleten keverjük. 100 ml vízmentes éterrel elporitjuk, szűrjük, majd a gyengén sárga, porszerű anyagot exszikkátorban szárítjuk. Halványsárga, higroszkópos anyagot kapunk, amelynek súlya: 1,30 g. R2f=0,\4 d) Boc-Aa-OPFP Molekulasúly: 403,32 2,4 g (10 mmol) Boc-antranilsavat feloldunk 20 ml THF-ban, és 0°C-ra hűtjük. Ezután keverés közben hozzáadunk 2,2 g (11 mmol) DCC-t és 2,0 g pentafluorfenolt 10 ml THF- ban oldva. A reakcióelegyet 3 órán át 0°C-on, majd szobahőmérsékleten másnapig keverjük. Az oldatot szűrjük, a maradékot 30 ml etil-acetátban oldjuk, és háromszor 10 ml jéghideg 10%-os citromsavval, majd háromszor 10 ml hideg vízzel, háromszor 10 ml telített nátrium-hidrogén-karbonáttal, végül háromszor 10 ml vízzel mossuk. Az etil-acetátos fázist vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk, szűrjük, vákuumban bepároljuk. A visszamaradó olaj +40C-on kristályosodik. Termelés: 3,06 g (76%) R|=0,90; R^°=0,85 e) Boc-Aa-Leu-Arg(N02)-Pro-NHEt Molekulasúly: 675,75 1,07 g (2 mmol) H-Leu-Arg(N02)-Pro-NHEt.HBr tripeptid sót oldunk 5 ml dimetil-formamidban, és 0°C-ra hűtjük. Hozzáadjuk 0,28 ml (2 mmol) trietil-amin és 806 mg (2 mmol) Boc-Aa-OPFP 5 ml dimetil-formamidos oldatát. Az oldat pH-ját ezután TEA-10 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
