194913. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a 6-os helyzetben aromás amino-karbonsavat tartalmazó új gonadoliberin-származékok és e vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
A visszamaradó olajat 50 ml 30%-os TFA diklór-metánban készült oldatába feloldjuk és 20 percig szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Ezt követően az oldatot vákuumban bepároljuk, a visszamaradó olajat éterrel eldörzsöljük. A szilárd anyagot a szűrön éterrel mossuk, majd vákuumban szárítjuk. Termelés: 15,9 g (62%) Op. Nem mérhető (erősen higroszkópos anyag) [œ]»°= -44,4° (c=l, metanol) Rj—0,32; Rf=0,37; R'f3=0,21 i) Z-Leu-üln-Pro-NHEt Molekulasúly: 518,57 7 g (26 mmol) H-Gln-Pro-NHEt.TFA-ot feloldunk 50 ml dimetil-formamidban, és az oldatot 0°C-ra hütjük. Az oldat pH-ját trietil-aminnal 8-ra állítjuk, majd hozzáadjuk 14 g (27,3 mmol) Z-Leu-pentaklór-íenilészter 40 ml dimetil-formamidban készült oldatát, és éjszakán át T-4°C-on keverjük. Másnap a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, és a maradékot feloldjuk 70 ml etil-acetátban. Az oldatot háromszor 15 ml hideg 0,01 n nátrium-hidroxiddal, majd háromszor 15 ml vízzel extraháljuk. A nátrium-hidroxidos és vizes extraktumokat egyesítjük és kétszer 10 ml etil-acetáttal kirázzuk. Az etil-acetátos fázisokat egyesítjük, vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot éterrel eldörzsöljük, a szilárd anyagot szűrjük, éterrel mossuk és vákuumban szárítjuk. Termelés: 10,4 g (77%) Op. 84-88°C [a]£°— -32,8° (c=l, metanol) Rf=0,90 j) H-Leu-GIn-Pro-NHEt.HBr Molekulasúly: 465,5 7,6 g (14,6 mmol) Z-Leu-Gln-Pro-NHEt-ot feloldunk 50 ml jégecetben, hozzáadunk 70 ml 4 n jégecetes hidrogén-bromidot, és az elegyet 90 percig szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Ezután az elegyet keverés közben, lassan 800 ml jéghideg éterbe öntjük. 30 perc elteltével a keverést megszüntetjük, majd a kiülepedett csapadékot szűrjük. A szilárd anyagot exszikkátorban foszfor-pentoxid fölött szárítjuk. Termelés: 7,9 g Op. 147°C [a]|°= -72,8° (c=l, 2 n ecetsav) R^=0,30; R)‘=0,82 k) Boc-antranilsav Molekulasúly: 237,27 4 g (30 mmol) antranilsavat feloldunk 20 ml dimetil-formamidban, és a pH-t trietil-aminnal 8-ra állítjuk. Ezután hozzáadunk 9 g terc.-butiloxi-karbonátot, és a reakcióelegyet másnapig szobahőmérsékleten keverjük. Az oldószert bepároljuk, a visszamaradó, sűrű olajat feloldjuk 50 ml etil-acetátban. A szerves fázist háromszor 20 ml jéghideg 0,01 n kénsavval, majd háromszor 20 ml vízzel mossuk. Az etil-acetátos oldatot nátrium-szulfá-7 ton szárítjuk, majd vákuumban bepároljuk. A visszamaradó, sűrű olaj jégszekrényben kristályosodik. Termelés: 5,7 g (80%) On. 91-93°C R9=0,87; R^°=0,79 l) Boc-Aa-Leu-GIn-Pro-NHEt Molekulasúly: 603,85 2,3 g (5 mmol) H-Leu-Gln-Pro-NHEt-hidrogén-bromid sót feloldunk 10 ml DMF-ban, 0°C-ra hűtjük, és az oldat pH-ját TEA-nal 8-ra állítjuk. Ezután az oldathoz adunk 750 mg (5,5 mmol) N-hidroxi-benztriazolt és 1,1 g (5,5 mmol) DCC-t. Ezt követően lassan az oldathoz csepegtetjük 1,3 g (5,5 mmol) Boc-antranilsav 5 ml DMF-ban készült oldatát, majd a reakcióelegyet 48 órán át szobahőmérsékleten keverjük. A kivált DCU-t kiszűrjük, majd az oldatot vákuumban bepároljuk. A maradékot feloldjuk 50 ml etil-acetátban, és háromszor 20 ml 10%-os citromsavval, háromszor 20 ml vízzel, háromszor 20 ml telített nátrium-hidrogén-karbonáttal, végül 20 ml telített nátrium-kloriddal kirázzuk. Az etil-acetátos fázist nátrium-szulfáton szárítjuk, majd vákuumban bepároljuk. Az olajos maradékot éterrel eldörzsöljük, a kivált halványsárga, porszerű anyagot szűrjük, éterrel mossuk. Termelés: 2,4 g (80%) Op. 119-121°C R®=0,91 Aminosav-analízis: Gin 0,97; Pro 1,03; Leu 1,00; Aa 0,92 m) H-Aa-Leu-GIn-Pro-NHEt.TFA Molekulasúly: 599,63 603 mg (1 mmol) Boc-Aa-Leu-Gln-Pro-etil-amidot oldunk 10 ml 30% -os trifluor-ecetsav diklór-metán a készült oldatában, majd szobahőmérsékleten keverjük 20 percen át. A TFA-t vákuumban gyorsan eltávolítjuk, majd a maradékot éterrel elporítjuk és szárítjuk. Termelés: 515 mg (86%) Rf=0,52 n) Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Aa-Leu-Gln-Pro-NHEt-acetát Molekulasúly: 1188,48 358 mg (0,5 mmol) a példa g) lépésében előállított Glp-His-Trp-Ser-Tyr-N2H3 pentapeptidet oldunk 10 ml dimetil-formamidban, 0cC-ra hűtjük, és keverés közben 0,34 ml 6 n sósavat, majd 37,7 mg nátrium-nitrit tömény vizes oldatát csepegtetjük hozzá. 5 perc elteltével hozzáadjuk 230 mg (0,5 mmol) H-Aa-Leu-Gln-Pro-NHEt.TFA tetrapeptid 1 ml dimetil-formamidban 0,34 ml trietil-amin jelenlétében készült 0°C-os oldatát. A reakcióelegyet szükség esetén TEA-nal semlegesre állítjuk, 2 órán át 0°C-on keverjük, majd hagyjuk szobahőmérsékletre felmelegedni. A dimetil-formamidot vákuumban eltávolítjuk, a maradékot Sephadex G-25 oszlopon (2X95cm) 0,2 n ecetsavoldatban kromatografáljuk. Az 8 194913 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 í 55 60 65 5
