194904. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 11béta-fenil-gonánok és az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
194904 szilikagélen, hexán — etil-acetát-eleggyel való kromatografálás után 1,6 g llß-(4-acetiI-fenil) -17ß-hidroxi-17a- (3-hidroxi-propil) - -4,9-ösztradién-3-ont kapunk, szilárd habos anyag formájában. [a]45 = +177,0° (metilén-dikloridban, c = 0,510). 19. példa 3- [1 lß-(4-Acetil-fenil)-17ß-hidroxi-3-oxo-4,9-ösztradién-17a-il] -propionsav-lakton A 18. példa szerint előállított termékből 1,51 g-ot feloldunk 63 ml acetonban, majd ehhez külső jeges-vizes hűtés közben cseppenként 2,1 ml Jones-reagenst adunk. Ezt követően a reakcióoldatot 15 percig szobahőmérsékleten keverjük, majd vízre öntjük, vizes ammóniaoldat hozzáadásával semlegesítjük és díklór-metánnal extraháljuk. A nyersterméket hexán — etil-acetát-elegyből kristályosítjukés így 1,06 g3- [ 1 lß-(4-acetil-fenil)-17ß-hidroxi-3-oxo-4,9-ösztradién-17a-i 1 ] -propionsav-laktont kapunk, melynek olvadáspontja: 243—245°C. [a]£5= +149,2° (metilén-dikloridban, c = 0,50). 20. példa llß-(4-Acetil-fenil)-15ß,17ß-dihidroxi-17a-(l-propinil)-4,9-ösztradién-3-on 500 ml steril tápoldatot (amely 1% glükózt, 0,1% élesztőkivonatot, 0,1% marhahúskivonatot (Beef-extrakt), 0,2% triptózt és 1,5% agart tartalmaz; pH = 7,2) beoltunk a Streptomyces platensis (NRRL 2364) 10 napos ferdeagar-tenyészetével, majd ezt 60 órán keresztül 30°C hőmérsékleten rázatjuk. A kapott előtenyészetből 300 ml-nyit átvezetünk egy 10 literes fermentorba, amely a fentiekben megadott összetételű steril táptalajból 5 litert tartalmaz. Ezután 220 fordulat/ /perc sebességgel végzett keverés és 5 liter/perc levegőztetés közben 29°C-on tenyésztjük a mikroorganizmust. 12 óra múlva a fenti tenyészethez hozzáadjuk 1,0 g 1 lß- (4-acetil-fenil) -17ß-hidroxi- 17a- ( 1-propinil) -4,9-ösztradién-3-on 60 ml dimetil-formamiddal készített és sterilre szűrt oldatát. A szubsztrátum koncentrációja ekkor 200 mg/1. Az átalakulás lefolyását vékonyréteg-kromatográfiás módszerrel ellenőrizzük; 36 órás kontaktidő után a fermentációt befejezzük. Ekkor a tenyészfolyadékot metil-izobutil-ketonnal extraháljuk, majd a kivonatot vákuumban, 30— 40°C-on bepároljuk. Az így kapott maradékot a habzásgátló szer (Silikon SH) eltávolítása végett hexánnal mossuk, majd szilikagélen, hexán — etil-acetát-eleggyel kromatografáljuk. A főfrakcióból kapott anyagot etil-acetát — diizopropil-éter-elegyből kristályosítjuk és így 400 mg (az elméletileg számított kitermelés 38,4%-a) cím szerinti vegyületet kapunk, melynek olvadáspontja: 152— 154°C. 25 21. példa 11 ß- (4-Acetil-fenil ) -16a, 17 ß-dihidroxi-17 a-( 1 -propinil ) -4,9-ösztradién-3-on A 20. példában ismertetett körülmények között Streptomyces toyocaensis (DSM 40030) mikroorganizmust tenyésztünk és a fermentációhoz 1,0 g 11 ß-(4-acetil-fenil)-17ß-hidroxi-17a- ( 1 -propinil) -4,9-ösztradién-3-ont adunk. A teljes fermentációs idő 95 óra, míg a kontaktidő 81 óra. Oszlopkromatográfiás módszerrel történő tisztítás, majd etil-acetát — hexán-elegyből végzett kristályosítás után 370 mg cím szerinti vegyületet kapunk, melynek olvadáspontja: 225—229°C. 22. példa I lß-(4-Acetil-fenil)-6a,17ß-dihidroxi-17a-(1 -propinil )4,9-ösztradién-3-on A 20. példában ismertetett körülmények között Nigrospora sphaerica (CBS 98469) mikroorganizmust tenyésztünk és a fermentációhoz 1,0 g 11 ß-(4-acetil-feniI)-17ß-hidroxi- 17a-( 1 -propinil)-4,9-ösztradién-3-ont adunk. A táptalaj összetétele azonban eltérő, nevezetesen: 3% glükózt, 1% kukoricalekvárt, 0,2% nátrium-nitrátot (NaNOs), 0,1% kálium-dihidrogén-foszíátot (KH2P04), 0,2% dikálium-hidrogén-foszfátot (K2HP04), 0,05% magnézium-szulfátot (MgS04), 0,002% vas(ll)-szulfátot (FeSOJ és 0,05% kálium-kloridot (KC1) tartalmazó és pH = 6 értékű közeget alkalmazunk. A fermentációs idő 112 óra, amiből a kontaktidő 100 órát tesz ki. Kromatográfiás úton történő tisztítás után 235 mg cím szerinti vegyületet kapunk, melynek olvadáspontja (etil-acetátból kristályosítva): 148—152°C. 23. példa II ß-(4-Acetil-fenil )-7a,l 7 ß-dihid roxi-17 a--(1 -propinil ) -4,9-ösztradién-3-on 1,0 g 1 lß-(4-acetil-fenil)-17ß-hidroxi-17a- (l-propinil)-4,9-ösztradién-3-ont Neurospora cassa (ATCC 9278) mikroorganizmussal fermentációs úton hidroxilezünk a 20. példában leírt körülmények között, de a 22. példában megadott összetételű táptalajt használjik. A terméket kromatográfiás módszerrel tisztítjuk és így 196 mg cím szerinti vegyületet kapunk, melynek olvadáspontja: 156— 159°C (hexán — etil-acetát-elegyből kristályosítva). A fermentációs idő ebben az esetben 123 óra, míg a kontaktidő 112 óra. 24. példa 1 lß-(4-Acetil-fenil)-6ß-klör-17ß-hidroxi-17a-( 1-propinil )-4,9-ösztradién-3-on A 22. példa szerint kapott 11 ß-(4-acetiI-fenil)-6a,17ß-dihidroxi-17a-(l-propinil) - 4,9 - -ösztradién-3-onból 140 mg-ot feloldunk 3 ml diklór-metánban, 0,02 ml piridínben és 0,4 ml tet aklór-metánban, majd az oldathoz 840 mg trifenil-foszfint adunk és 2 óra hosszat +5°C hőmérsékleten keverjük. Ezt követően ammónium-klorid-oldatra öntjük és diklór-metánnal extaháljuk. A nyersterméket szilikagélen kromatografáljuk, ennek során eluálószerként hexán — etil-acetát-elegyet használunk, így amorf por alakjában 116 mg cím szerinti 26 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 14
