194870. lajstromszámú szabadalom • Eljárás dihidro-piridin-karbonil-vegyületek és az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
194870 mely, a találmány céljaira alkalmas vegyület alkalmazható. Az ilyen kiindulási anyagokra példákat a referenciapéldákban fogunk adni. A találmányt közelebbről a következő kísérleti példával, kiviteli példákkal és referenciapéldákkal kívánjuk megvilágítani. A kiviteli példákban és a referenciapéldákban az oszlopkromatografálásnál az eluátumban a termék jelenlétét vékonyrétegkromatográfiásan vizsgáljuk. Az ilyen vizsgálatokhoz a Merck and Co. cég által szállított, kész 60F254 jelzésű lemezeket használunk. Futtatószerként az oszlopkromatografáláshoz használt eluálószert alkalmazzuk. Ibolyántúli fénnyel detektálunk. Azokat a frakciókat tekintjük a kívánt terméket tartalmazónak, amelyek 48%-os hidrogén-bromiddal végzett permetezés után olyan foltokat tartalmaznak, amelyek ninhidrinnel bíborvörös színt adnak. Olyan esetben, amikor az eluálásnál kétféle oldószert említünk, akkor az első szolgál az oszlop mosására és a melléktermékeknek az oszlopból való eltávolítására, míg a második a termék eluálására, ha csak másképpen nem jelezzük. A termékek szárítását vízmentes nátrium-szulfát fölött végezzük, ha csak eltérő megjegyzést nem teszünk. Az Amberlite vagy Sephadex márkanevű ioncserélő gyantákon végzett oszlopkromatografálásos tisztításnál eluálószerként— ha csak ellenkező értelmű megjegyzést nem teszünk— először vizet, majd fokozatosan növekvő koncentrációjú vizes etanol-oldatot használunk. Az Amberlite márkanevű gyanta a Rohm and Haas amerikai egyesült államokbeli cég, a Dowex márkanevű gyanta a The Dow Chemical Co. amerikai egyesült államokbeli cég és a Sephadex márkanevű gyanta a Pharmacia Fine Chemicals svéd cég terméke. Mindegyik megadott hőmérséklet korrigálutlan. A százalékos értékek súlyszázalékos értékek, kivéve az oldószerek esetét, amelyeknél térfogatszázalékos értékeket említünk. Az NMR-spektrumokat Varian EM 390 (90 MHz) és T 60 (60 MHz) típusú készülékekkel vettük fel, külső vagy belső referenciaanyagként tetrametil-szilánt használtunk és a delta-értékeket p.p.m.-ben adjuk meg. A kémiai eltolódások megadása során a következő rövidítéseket használjuk: s = = szingulett; d = dublett; dd = kettős dublett; t = triplett; q — kvartett; m = multiplett; ABq = AB típusú kvartett;J = kapcsolási konstans; THF = tetrahidrofurán; DMF = = dimetil-formamid; DMSO = dimetil-szulfoxid; br. = széles, arom = aromás és sh = = váll. A kiviteli példákban még a következő rövidítéseket használjuk: Ph = fenil; Me = metil; Et = etil, DMSO = dimetil-szulfoxid és D20 = nehézvíz. 17 10 Kísérleti példa A példa után következő táblázatban megadjuk néhány, a kiviteli példák szerint előállított tipikus (I) általános képletű vegyület minimális gátlási koncentrációját (MIC-értékét). A vizsgált vegyületek MIC-értékét agar-agar hígításos módszerrel határoz-zuk meg. A kísérleti vegyület vizes oldatából— amelyet sorozatos hígítás útján kaptunk— 1,0 ml-t öntünk a kísérleti Petri-csészébe, majd a csészébe még 9,0 ml Trypticase Soy márkanevű agar-agar oldatot öntünk, és a kétféle anyagot összekeverjük. Az így kapott kevert agar-agar lemezre a kísérleti mikroorganizmus mintegy 108CFU/ml koncentrációjú bakteriális szuszpenziójából egy oltókacsnyit viszünk fel. 37°C-on egy éjszakán át végzett inkubálást követően megállapítjuk a kísérleti vegyületnek azt a legkisebb koncentrációját, amely nyilvánvaló módon a kísérleti mikroorganizmus növekedésének teljes gátlását okozza. Ez lesz a MIC-érték. Kísérleti mikroorganizmusként Enterobacter cloacae IFO—12937 (1) és Klebsiella pneumonia TN—1711 (2) mikroorganizmusokat használunk. \ kapott eredményeket a következő táblázatban adjuk meg, mcg/ml dimenzióban. Kísérleti vegyület mikroorganizmus (a példa sorszáma) (1) (2) 18 63 6,25 0,2 66 3,13 0,78 70 1,56 — 130 1,56 0,39 133 — 1,56 135 — 6,25 141 6,25 3,13 144 3,13 0,39 152 3,13 6,25 I. Példa 201,9 mg qisz-3-(2- (2- (klór-acetamidoí -4- -tiazolil] -2- (metoxi-imino)-acetamido)-2-oxo-azetidin-4-karbonsav-metil-észter (szín-izomer) 3,5 ml N,N-dimetil-formamiddal készült oldatához 159,2 mg piridin-kéntrioxid komplexet adunk és az elegyet szobahőmérsékleten öt napon át keverjük. Ezután újabb 80 mg piridin-kéntrioxid komplexet adunk hozzá és a keverést további két napon át folytatjuk. A reakcióelegyhez 50 ml dietil-étert adunk, ami az oldhatatlan anyagok kicsapódását eredményezi. A felső, éteres fázist dekantáljuk, majd a csapadékot újból éterrel mossuk. Az éteres réteget ismét dekan-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
