194808. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új alfa-allén-alfa-aminosavak és ilyen hatóanyagokat tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
194808 lee RP-18 oszlopon analizáltunk. 4,35 pH-értékű pufferrel (0,1 mól) (63 térf.%) NaOAc, 0,1 mól (32 térf.%) citromsav és 15 térf.% metanol), 2,5 ml/perc áramlási sebességgel végzett eluálással a dopamint (RT=2,8 perc) elválasztottuk az L-DOPA-tól (RT=1,9 perc). A dopamin kvantitatív meghatározását úgy végeztük, hogy a katecholt +0,25 V-nál az első analitikai elektrokémiai cellában orto-kinonná oxidáltuk, majd az orto-kinont a második analitikai cellában, —0,25 V feszültségnél szelektíven redukáltuk. Az ESA elektrokémiai detektornak ez a konfigurációja a katecholaminok nagy érzékenységű és szelektivitású detektálását tette lehetővé (injektálásonként kisebb, mint 10 pikomól). A bakteriális aromás aminosav dekarboxilázoknak a 200—1000 mikromól mennyiségben alkalmazott inhibitorokkal, például 2- -amino-2- (4-hidroxi-benzil) -penta-3,4-dién - savval vagy 2-amino-2-benzii-penta-3,4-diénsavval kiváltott időfüggő inaktiválását pH 5,5 közegben, 37°C-on végeztük. A tirozin dekarboxiláz (ex Streptococcus faecalis) maradék aktivitását a p-tiramin termelés mérésével, 5,5 pH-értékének, 37°C-on határoztuk meg. A p-triamint nagynyomású folyadék-kromatográfiás módszerrel különítettük el, majd mennyiségét +0,7 v feszültség mellett végzett elektrokémiai oxidációval határoztuk meg. Az L-fenil-alanin dekarboxiláz (ex Streptococcus faecalis) maradék aktivitását a fenil-etil-amin termék gázkromatográfiás mérésével, szubsztrátként L-fenil-alanint (2 mM) használva határoztuk meg. Az enzimatikus reakcióelegy közvetlen injektálásával (1—5 mikroliter) a 10% Apiezon L-Chromosorb 21 80/100 töltettel megtöltött (dezaktiválás 2%-os kálium-hidroxiddal) standard üveg oszlopra el tudtuk különíteni az aromás amint a reakcióelegyből. A termék keletkezésének 5 mérését FID detektálással tettük kvantiatívvá. 23. példa In vivo vizsgálatok Módszerek 10 A kísérlethez 180—335 g súlyú, hím Sinv./S.D./ dBR patkányokat használtunk. A patkányokat ötös csoportokba osztottuk, és vizet vagy különböző dózisokban 2-amino-2 - (3-hidroxi-benzil)-penta-3,4 - diénsavat 15 vagy 2-amino-2-(3,4-dihidroxi-benzil)-penta - -3,4-diénsavat adtunk az állatoknak, 30 perccel egy 200 mg/kg-os L-DOPA adag intraperitoneális adagolása előtt. 15 perccel később megkezdtük az állatok vizuális meg- 20 figyelését, és a megfigyeléséket 2 órán át 15 percenként folytattuk. A viselkedést a köve+ező skála szerint osztályoztuk: 0 = alvás 1 = az állatok ébren vannak és nyugodtak 25 2 = az állatok éberek és mozognak 3 = az állatok éberek és időnként szaglásznak 4 = az állatok állandóan szaglásznak 5 = az állatok időnként harapdálnak 30 6 = az állatok folyamatosan harapdálnak Eredmények A 2-amino-2- (3-hidroxi-benzil) -penta-3,4- -diénsav 3—30 mg/kg i.p. dózisban vagy 35 30—150 mg/kg s.c. dózisban potencirozta az L-DOPA-val indukált viselkedést. Hasonlóan, a 2-amino-2-(3,4-dihidroxi-benzil)-penta-3,4-diénsav 30 mg/kg i.p. vagy s.c. dózisban aktívnak mutatkozott. 22 1. táblázat Vegyület Dózis mg/kg Adagolás Viselkedési osztályzat 60 perc után VÍZ-i.p* 1,0 2-amino-2-(3-hidroxi-30-150 s.c. 3,4 benzil)-penta-3,4--diénsav 3-30 i.p. 3,4 2-amino-2-(3,4-di-30 s.c. 4,0 hidroxi-benzil)-penta-3,4-diénsav 30 i.p. 4,0 24. példa A 2-amino-2-(3-hidroxi-benzil) -penta-3,4- -diénsav toxicitása CMC vivőanyagban kiszerelt 2-amino-2- - (3-hidroxi-benzil)-penta-3,4-diénsavat napi 12 egy alkalommal 0, 62,5, 125, 250 és 500 mg/ /kg-os dózisokban 6 hím egérből álló csoportoknak adtunk. Az állatokat 21 napon át megfigyeltük, és elhullást egyik csoportban sem észleltünk. Tehát a 2-amino-2- (3-65
