194807. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tironin-származékok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
194807 A GPDH aktivitást 100 pl hígított szövet-homogenizátumban 37°C-on határozzuk meg, G.H. Fried és munkatársai módszere szerint (Proc. Soc. Exp. Bioi. Med. 1961, 107, 523— —525.). Ebben a vizsgálatban a GPDH-t arra használjuk fel, hogy katalizálja a 2-p-jód-3-nitro-5-fenil-tetrazólium-klorid ( I.N.T. ) sn-glicerofoszfát által a megfelelő formazánná történő redukcióját. A formazánt etil-acetáttal extraháljuk és meghatározzukazextraktum 490nm-en mutatkozó abszorpcióját. Mindegyik szövet aktivitását két párhuzamos kísérletben és két hígításban határozzuk meg és korrigáljuk az I.N.T. nem-specifikus redukciója figyelembe vételével, amely az sn-glicero-3-foszfát távollétében mérhető. (c) Anyagcsere-sebesség Az anyagcsere sebességét kalibrált, nyomás által működtetett berendezéssel határozzuk meg, amely oxigént adagol kis, ismert térfogatokban patkányoknak, zárt kamrában, amely a kilégzett C02 abszorpciójához nátronmeszet tartalmaz. A hőmérsékletet 29± -F0,3°C-on tartjuk. Egy másik megoldás szerint az állatot tartalmazó kamrán ismert sebességgel levegőt vezetünk át és az oxigén-koncentráció csökkenését használjuk fel az állat oxigén-fogyasztása mérésére. (d) A plazma-koleszterinre kifejtett hatás Az összes plazma-koleszterin szinteket valamely koleszterinoxidáz kit, pl. a Merck CHOD jodid kolorimetriás kit alkalmazásával határozzuk meg. (e) A plazma-triglicerid szintre kifejtett hatás A plazma-triglicerid szinteket enzimes kolorimetriás vizsgálatokkal (Merck System GPQ-PAP módszer) határozzuk meg. Eredmények (i) A GPDH szintekre és az anyagcsere-sebességre kifejtett hatás Az 1.—4., 8., 12., 16.—18., 20., 25., 33.-38. és 42. példa szerinti vegyületeket 7 alkalommal visszük be orálisan vagy intramuszkulárisan, napi 0,1—50 mg/kg-os dózisban. Ezt követően azt találtuk, hogy az anyagcsere alap-sebessége eutiroid patkányokban kb. 20%-al emelkedett, a GPDH szintek pedig 3—5-szörösére növekedtek anélkül, hogy jelentős hatás érvényesült volna a szív-GPDH szintek vonatkozásában. Ezen vizsgálatok alatt nem volt megfigyelhető jelentős toxikus mellékhatás. (ii) Az összes plazma koleszterin és triglicerid szintre kifejtett hatás Az 1. példa szerinti vegyület — az L-3,5- -dibróm-3’ - (6-oxo-3 ( IH) - piridil-metil) - tiro 53 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 nin — max. 42%-kal csökkenti kutyákban az összes koleszterin szintet és 10—20%-kal növeli az anyagcsere sebességét anélkül, hogy befolyásolná a szívfrekvenciát. Ezeket az eredményeket 7, napi 1 — 10 mg/kg-os i.v. adag bevitele után állapítottuk meg. A 3. példa szerinti vegyület ’— az. L-3,5- diklór-3’- (6-oxo-3 ( 1H) -piridil-metil ) - tironin — max. 55%-kal csökkenti az összes plazma koleszterin szintet kutyákban anélkül, hogy befolyásolná az anyagcsere sebességét vagy a szívfrekvenciát. Ez az eredmény 7, napi 8,5 mg/kg-os napi i.v. adag bevitele után mutatható ki. A 33. példa szerinti vegyület — az L-3,5- -dibróm-3’-(6-oxo-3(l H) -piridazinil-metil ) - -tironin a) eutiroid macskákban 40%-kai csökkenti az összes szérum koleszterin szintet 7, napi 0,1 mg/kg-os i.v. dózis bevitele után anélkül, hogy befolyásolná az anyagcsere sebességét vagy a szívfrekvenciát. Ugyanebben a kísérletben a vegyület csökkenti az LDL koleszterin szintet és az LDL/HDL koleszterin arányt; (b) nem befolyásolja a szívfrekvenciát vagy az anyagcsere sebességét hipotiroid patkányokban 7, napi 0,02 mg/kg i.v. dózis bevitele után; (c) eutiroid patkányokban 13%-kai csökkenti az összes plazma koleszterin szintet, miután a patkányokat koleszterinnel tápláltuk; ezt az eredményt 7, napi 0,01 mg/kg orális dózis bevitele után állapítottuk meg; 7, napi 0,1 mg/kg orálisan való bevitele után a csökkenés mértéke 28%; d) koleszterinnel etetett hipotiroid patkányokban 60%-kal csökkenti az összes plazma koleszterin szintet 14, napi 0,01 mg/kg-os orális dózis bevitele után; ;e) koleszterinnel etetett eutiroid patkányokban 71%-kal csökkenti a plazma triglicerid koncentrációt 21, napi 0,1 mg/kg-os orális dózis bevitele után; ■ f) normális étrenden tartott eutiroid patkányokban 71%-kal csökkenti a plazma triglicerid koncentrációt 21, napi 1 mg/kg-os orális dózis bevitele után; íg) koleszterinnel etetett hipotiroid patkányokban 73%-kál csökkenti a plazma triglicerid koncentrációt 21, napi 0,1 mg/kg-os orális dózis bevitele után. A következő Táblázatban mutatjuk be a 2., 20., 34., 36., 37. és 42. példa szerinti vegyület folyamatosan, több napon át orálisan való bevitele hatását koleszterinnel etetett hipotiroid patkányok összes plazma koleszterin szintjére. 54 Példa Napi orális dózis, mg/kg Napok száma-\z összes plazma kol rin koncentráció %-o csökkenése 2. 0,10 7 64 20. 0,01 14 27 34. 0, 10 7 74 36. 0,01 7 68 37. 0,10 7 60 42. 0,01 7 83 28
