194567. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 6-szubsztituált metilén-penicillánsav-származékok előállítására
13 194 5(>7 14 Mint korábban leírtuk, a találmány szerinti eljárással előállított (I) általános képletü vegyületek, amelyekben az általános képletben R1 jelentése hidrogénatom, és ezek sói, béta-laktám antibiotikumokkal kombinációban alkalmazva in vitro baktériumellenes tesztekben szinergetikus aktivitást mutatnak. Ezt az aktivitást a különféle mikroorganizmusokkal szemben kifejtett minimális gátlási koncentráció (MIC) mcg/ml egységben történő mérésével határozhatjuk meg. A meghatározási eljárás az International Collaborative Study on Antibiotic Sensitivity Testing (Ericsson és Sherris, Acta Pathologica et Microbiologia Scandinav, Supp. 217, Section B: 64—68 /1971 /) által javasolt módszer, és BHI (brain heart infusion) agar-agart és inokulum átvivő eszközt alkalmaz. Éjszakán át tenyésztett kémcső-tenyészeteket 100-szorosra hígítottunk és ezeket alkalmaztuk standard inokulumként (körülbelül 0,002 ml, amely 20,000 10,000 sejtet tartalmaz, volt bevezetve az agar-agar felületére; 20 ml HHI agar-agar/tál). Tizenként, kétszeres vizsgált anyag hígítást alkalmaztunk, amelynek kezdeti koncentrációja 200 mcg/ml volt. Az egyedüli kolóniákat figyelmen kívül iiagytuk, amikor a 18 órás 37 °C-os kultúrák vizsgálatát elvégeztük. Az adott mikroorganizmus (MIC) érzékenységének a vizsgált vegyület, vagy kombináció azon legkisebb koncentrációját tekintettük, amely szabad szemmel való meghatározás alapján a növekedés teljes gátlását idézte elő. Azok a találmány szerinti eljárással előállított vegyületek, amelyekben az (I) általános képletben R1 jelentése hidrogénatom, ismert béta-laktám antibiotikumokkal kombinációban ipari antibiotikumokként is felhasználhatók. Például vízkezelés, iszap kontroll, festékmegóvás és faanyag védelem, valamint helyi fertőtlenítés végrehajtására alkalmazhatók. Az ilyen felhasználás esetében ezeket az aktív hatóanyagokat előnyösen nem toxikus hordozóanyaggal, például növényi vagy ásványi olajjal, vagy lágyító krémmel keverve alkalmazzuk. Az aktív hatóanyagok feloldhatók vagy diszpergálhatók folyékony hígítóanyagokban vagy oldószerekben, mint például vízben, alkanolokban, glikolokban vagy ezek keverékében is. A legtöbb esetben körülbelül 0,1 10 súly% mennyiségű aktív hatóanyagot tartalmazó készítmény kielégítő eredménnyel alkalmazható. A találmány szerinti eljárással előállított (I) általános képletű vegyületek, ahol az általános képletben R1 jelentése Rb, mint korábban leírtuk, különösen előnyösek mint potenciális béta-laktamáz enzim inhibitorok. Ennek a mechanizmusnak a révén megnövelik a béta-laktám antibiotikumok (penicillinek és cefalosporinok) aktivitását, különösen olyan mikroorganizmusokkal szemben, amelyek béta-laktamázt termelnek. A találmány szerinti eljárással előállított (I) általános képletű vegyületek béta-laktám antibiotikumok hatását megnövelő képességét referencia kísérletek alapján határozhatjuk meg, amelyekben a beta-laktám antibiotikumot egyedül alkalmazzuk. Meghatározzuk az egyedül alkalmazott béta-laktám és az (I) általános képletű vegyület, ahol az általános képletben R1 jelentése hidrogénatom, esetében talált MIC értékeket. Ezután ezeket a MIC értékeket összehasonlítjuk az adott antibiotikum és a találmány szerinti eljárással előállított (I) általános képletű vegyület — ahol az általános képletben R1 jelentése hidrogénatom — kombinációjának alkalmazása esetében tapasztalt MIC értékkel. Amennyiben a kombináció nntibiolikus hatása sokkal nagyobb, mini amit a két külön vegyület egyedüli hatása alpján várnánk, a hatás szinergetikus megnövelésének esete áll fenn. A kombinációk MIC értékeit Barry és Sabath („Manual of Clinical Microbiology” ed. Lenette, Spaulding and Truant, 2nd, Edition, 1974, American Society for Microbiology) módszere szerint határoztuk meg. A találmány szerinti eljárással előállított (I) általános képletű vegyületek, ahol az általános képletben R1 jelentése hidrogénatom vagy in vivo könnyen hidrolizálható észterképző csoport, megnövelik in vivo a béta-laktám antibiotikumok hatásosságát. Ennél fogva csökkentik a szükséges antibiotikum mennyiséget egér esetében egyébként halálos dózisú béta-laktamázt termelő baktérium inokulum fertőzésével szemben. Ennek meghatározására egerekbe, intraperitoneálisan a vizsgálandó mikroorganizmus standard kultúráját adagoltuk 5 százalékos sertés gyomor mucinban, és akut kísérleti fertőzést hoztunk létre. A fertőzés súlyosságát úgy standardizáltuk, hogy az egereknek letális dózisú mikroorganizmust adagoltunk (a letális dózis az a minimális mennyiségű inokulum, amely a fertőzött és nem kezelt kontroll egerek száz százalékos elpusztulását okozza). A vizsgált, találmány szerinti eljárással előállított vegyületet antibiotikummal kombinálva különböző dózisban adagoltuk i.p. vagy p.o. módon a fertőzött egerek csoportjainak. A vizsgálat végén a keverék aktivitását úgy határoztuk meg, hogy megszámoltuk az adott dózissal kezelt állagok között a túlélő állatok számát. Az aktivitást az adott dózis esetében túlélő állatok számának százalékában vagy PD5o (az a dózis, amely a fertőzött állatok 50 %-át védi meg) értékben határoztuk meg. A találmány szerinti eljárással előállított (I) általános képletű vegyületek azon tulajdonsága, hogy megnövelik a béta-laktám antibiotikumok hatásosságát béta-laktamázt termelő baktériumokkal szemben, lehetővé teszi, hogy ezeket béta-laktám antibiotikumokkal kombinálva emlősök és különösen ember baktériumos fertőzésének kezelésére alkalmazzuk. A baktériumos fertőzés kezelésére a találmány szerinti eljárással előállított (I) általános képletű vegyületet a béta-laktám antibiotikumokkal keverve adagolhatjuk, és így a két hatóanyagot szimultán juttathatjuk a szervezetbe. Más esetben a találmány szerinti eljárással előállított (1) általános képletű vegyületet, mint külön hatóanyagot adagolhatjuk a béta-laktámmal végzett kezelés során. Bizonyos esetekben a kezelt egysdet a találmány szerinti eljárással előállított (I) általános képletü vegyülettel előnyösen a béta-laktámmal végzett kezelés megkezdéseként, előzetesen kezeljük. Amennyiben a találmány szerinti eljárással előállított (1) általános képletű vegyületet, ahol az általános képletben R1 jelentése Rb, aminek jelentése a fent ekben megadott, a béta-laktám antibiotikum hatásnövelésére alkalmazzuk, a találmány szerinti eljárással előállított vegyület és a béta-laktám antibiotikum keverékét alkalmazzuk, előnyösen a szokásosan alkalmazott gyógyszerészeti hordozóanyagokkal vagy hígí-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
