194317. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A40926 antibiotikum komplex és tiszta komponensei, a PA,PB,A,B,BO faktor, valamint ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 szilanizált izilikagél — 60 F2 54 Merc — lemezeket használva (rétegvastagság 0,25 mm), Kimutatás:- UV fény,- Pauly reagenssel — diazotált szulfanilsav (J. Chromatog. 20, 171, 1965 és Z. Physiol. Chem. 292, 99, 1953) - sárga szín,- bioautográfia Bac. subtilís ATCC 6633 alkalmazásával, Davis — f. minimális táptalajon. H)A molekulatömeg kb. 1730 az FAB-MS spektrum alapján, amely szerint az M ♦ H csúcs 1731-nél helyezkedik el. Az A 40926 antibiotikum PA faktor fiziokémiai jellemzői: A) A 7. ábrán szemléltetett UV abszorpciós spektrum a következő abszorpciós maximumokat mutatja: lambdamax (nm) a) 0,1N HC1 282 b) 0,1N KOH 300 c) pH 7,38 foszfát puffer 282 300 (váll.) d) pH 9,0 foszfát puffer 283 B) A 8. ábrán szemléltetett IR ab 300 (váll.) B) A 8. ábrán szemléltetett IR abszorpciós spektrum a következő abszorpciós maximumokat mutatja (cm1): 3700-3100, 3000-2800 (nujol), 1760-1710, 1655, 1620-1550, 1505, 1460 (nujol), 1375 (nujol), 1260, 1250-950, 845, 805, 720 (nujol). C) A 9. ábrán szemléltetett 'H-NMR spektrum a következő jel-csoportokat (ppm-ben) mutatja 270 MHz-nél 1 H-NMR módszerrel felvéve, DMSO-d,-ban (hexadeutero-dimetilszulfoxid), belső standardként TMS-t (0,00 ppm) alkalmazva: delta, ppm: 0,86 (CH3-dublettek), 1,15—1,22 (m, (CHj) ), 1,41 (m, (CH2)), 2,01 (s, CH3), 2,01 (m, ?CH2)), 2,28 (s, N-CH3), 4,26-5,96 (széles, peptid és aromás metilek), 6,33—7,73 (széles, aromás CH csoportok és peptid NH csoportok). D) Retenciós idő (R.) 1,15 a teikoplanin A2 2. komponenshez viszonyítva (Rt = 20,3 perc) fordított fázisú HPLC módszerrel a Következő körülmények között végzett elemzés során: oszlop: Ultrasphere ODS (5 pm) Altex (Beckman), 4,6 mm (belső átmérő) x 250 mm, elő-oszlop: Brownlee Labs RP 18 (5 pm), A eluálószer: CH3CN 10% pH 6,0-ra (2,5 g/1) NaH2P04 . H20 90% beáUítva, B eluálószer: CH3CN 70% pH 6,0-ra (2,5 g/1) NaH2P04 . H20 30% beáUítva e' íálás: lineáris grádiens 5%—60% között (B eluálószer A eluálószerben), 40 perc alatt, áramlási sebesség: 1,8 ml/perc, UV detektor: 254 nm, belső standard : teíkoplain A2 2. komponens (Gruppe Lepetit S. p. A.) E) A teikoplanin A2 2. komponenshez viszonyítva az Rj- érték 0,62 a következő kromatográfiás rendszerben: 5%-os (tömeg/térf.) vizes Na2S04 70, acetonitril 30, szilanizált szilikagél - 60 F2«4 Mere - lemezeket alkalmazva (rétegvastagság 0,25 mm), 2 Kimutatás:- UV fény,- Pauly reagenssel - diazotált szulfanilsav (J. Chromatog. 20, 171, 1965 és Z. Physiol. Chem. 292, 99,1953) - sárga szín, • — bioautográfia Bac. subtilis ATCC 6633 alkalmazásával, Davis-f. minimális táptalajon. F) Molekulatömeg kb. 1758 az FAB-MS spektrum alapján, amelyen számos csúcs látható, a legintenzívebb 1761-bél. A FAB-MS elemzés műveleti körülményei a következők: berendezés: VG Mod ZAB SE, FAB ágyúval — Ion Tech - eüátva körülmények: pozitív FAB, Xe gyorsító feszültség 8 kV matrix : tioglicerin-glicerin 1 : 1 térf./térf.). Az A 40926 antibiotikum PB faktor fizikokémiai jellemzői: A) A 10. ábrán szemléltetett UV abszorpciós spektrum a következő abszorpciós maximumokat mutatja: lambdamax (nm) a) 0,1N HC1 282 b) 0,1N káliumhidroxid 300 c) pH 7,38 foszfát puffer 282 d) pH 9,0 foszfát puffer 282 300 (váU.) B) A 11. ábrán szemléltetett IR abszorpciós spektrum a következő abszorpciós maximumokat mutatja (cm'1 ): 3700-3100, 3000-2800 (nujol), 1760-1710, 1655, 1620-1560, 1605, 1480-1420 (nujol), 1375 (nujol), 1320-1270, 1230-1190, 1150, 1120-920, 845, 810, 720 (nujol). C.l) A 12. ábrán szemléltetett ‘H-NMR spektrum a következő jel-csoportokat mutatja (ppm-ben) a 270 MHz tartományban DMSO-d6-ban (hexadeutero-dimetilszulfoxid-, belső standardként (0,00 ppm) TMS-t használva: delta, ppm-ben: 0,84 (d, izopropil-metilek), 1,17 (m, (CH2) ), 1,43 lm, (CH2), 1,99 (s, CH3), 2,01 (m, (CB,1)), 2,31 (s, N-CH3), 2,79 (dd, C-H), 3,70 (m, C-H), 4,06 - 6,02 (széles, peptid és aromás CH-csoportok), 6,45-7,74 (széles, aromás CH-csoportok és peptid NH-csoportok) 8,19-9,99 (széles, peptid NH-csoportok és fenolos OH-csoportok). C.2) A 13. ábrán szemléltetett 1 H-NMR spektrum a következő jel-csoportokat mutatja (ppm-ben) 270 MHz-nél (DMSO-d6 ♦ CF3COOD>ben belső ■ standardként (0,00 ppm) TMS-t használva: delta, ppm-ben: 0,84 (d, izopropü-metilek), 1,13 (m, (CH2) ), 1,40 (m, (CH2)), 1,98 (s, CH3), 2,00 (m, (CH2), 2,92 (dd, C-H), 3,29 - 3,71 (m, cukor C-H-csoportok), 4,07-6,09 (s és m, peptid és aromás CH-csoportok (6,45 - 7,83 (s és m, aromás CH-csoportok és peptid NH-csoportok) 8,17-10,38 peptid NH-csoportok, fenolos OH-csoportok). D)A retenciós idő (1^) 1,27 és 1,32 a teikoplanin A2 2. komponenshez (R. = 20,3 perc) viszonyítva, a fordított fázisú HPLC technikával a következő körülmények között végzett elemzés során: oszlop: Ultrasphere ODS (5 /xm) Altex (Beckman) 4,6 mm (belső átmérő) x 250 mm, elő-oszlop: Brownlee Labs RP 18 (5 #im), 194317 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 9
