194317. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A40926 antibiotikum komplex és tiszta komponensei, a PA,PB,A,B,BO faktor, valamint ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására

1

2

Az eluálószer:

CH3CN 10% pH 6,0-ra

(2,5 g/1) NaH2P04 . H20 90% beállítva

B eluálószer;

CH3CN 70% pH 6,0-ra

(2,5 g/1) NaH2P04 . H20 30% beállítva,

eluálás: lineáris grádiens 5% — 60% között (B eluálószer az A eluálószerben), 40 perc alatt, áramlási sebesség: 1,8 ml/perc,

UV detektor: 254 nm,

belső standard: teikoplanin A2 2. komponens (Gruppe Lepetit S. p. A.).

E) Az R érték a teikoplanin A2 2. komponenshez viszonyítva 0,53 a következő kromatográfiás rendszerben :

5%-os (tömeg/térf.) vizes Na2S04 70,

acetonitril 30,

szilanizált szilikagél (60 F254 Merck) lemezek alkalmazásával (rétegvastagság 0,25 mm),

Kimutatás:- UV fény,- Pauly reagenssel — diazotált szulfanilsav (J. Chromatog. 20, 171, 1965 és Z. Physiol. Chem. 292, 99, 1953) — sárga szín, — bioautográfia Bac. subtilis ATCC 6633 alkalmazásával, minimális Davis-f. táptalajon.

F) A molekulatömeg kb. 1772 az FAB-MS spektrum alapján, amelyen számos csúcs látható, a legintenzívebb csúcs 1776-nál. Az FAB-MS elemzés műveleti körülményei a következők:

berendezés: VG Mod. ZAB, FAB ágyúval (Ion Tech.) ellátva

körülmények: pozitív FAB, Xe

gyorsító feszültség 8 KV matrix : tioglicerin-glicerin 1 :1 (térf./térf.).

A találmány szerinti vegyületek antibakteriális aktivitása in vitro a standard hígítási próbák segítségével mutatható ki, különböző mikroorganizmusok alkalmazásával.

Az MIC (minimális gátló koncentráció (meghatározásához alkalmazott táptalajok és tenyésztési körülmények a következők: Isosensitest húsleves (Oxoid) — 24 óra a Staphylococcus törzsek, a Strept. faecalis és a Gram-negatív baktériumok (E. coli, Pseudomonas, Proteus) esetében: Todd-Hewitt húsleves (Difco) — 24 óra más Streptococcus törzsek esetében: GC alap-húsleves (Difco) - 1% Isovitalex (BBL) - 48 óra, C02-ben dúsított atmoszféra a Neisseria gonorrhoeae esetében, GB alap-agar (Difco) ♦ 1% Isovitalex ♦ 0,001% hemin - 24 óra a Haemophilus influenzae esetében, AC húsleves (Difco) - 24 óra, anaerób atmoszféra a Clostridium perfringens esetében, Wilkins-Chalgren agar (1.: T. D. Wilkins és S. Chalgren, Antimicrob. Ag. Chemother. 10, 926, 1976) - 48 óra, anaerób atmoszféra a többi anaerób esetében (Clostr. difficile, Propionbacterium acnes, Bacteroides fragilis), PPLO húsleves (Difco) — 10% lószérum + 1% glukóz — 48 óra a Mycoplasma gallisepticum esetében, élesztő nitrogén alapleves (Difco) - 24 óra a Candida albicans esetében. A Candida albicans kivételével (30°C) az inkúbálást 37°C-on végezzük. Az inokulumok a következők: 1% (térf./térf.) a 48 órás leves-tenyészetből a M. gallisepticum esetében: kb. 104*—10’ telepképző egység (ml a többi, leves-hígításos MIC meghatározás esetében, kb. 104-105 baktérium/folt (többhelyes inokulátorral beoltva) az agar-hígításos MIC meghatározás esetében (H. influenzae, C. difficile, P. acnes, B. fragilis).

IV. Táblázat

A 40926 antibiotikum A B PA PB

Törzs________________faktor, MIC (pg/ml)______

1.

0,13

0,13

0,5

1

2.

0,13

0,13

0,5

1

3.

0,25

0,13

2

2

4.

4

4

5.

0,06

0,06

6.

0,063

0,063

0,06

0,03

7.

0,063

0,063

0,06

0,03

8.

0,13

0,13

0,06

0,13

9.

0,016

0,016

0,008

0,008

10.

0,25

0,13

0,25

0,13

11.

0,03

0,016

0,03

0,03

12.

1

0,5

4.

. 2

13.

64

64

64

64

14.

128 f.

128 f.

128 f.

128 f.

15.

128 f.

128 f.

128 f.

128 f.

16.

128 f.

128 f.

128 f.

128 f.

17.

64

64

64

64

18.

128 f.

128 f.

19.

64

64

128

64

Jelmagyarázat :

1. : Staph, aureus ATCC 6538

2. : Staph, aureus Tour (LI65) 104 tke/ml

3. : Staph, aureus Tour (LI65) 10® tke/ml

4. : Staph, epidermidis ATCC 12228

5. : Strept. mitis L 796 (klinikai izolátum)

6. : Strept. pyogenes C203

7. : Strept. pneumoniae US41

8. : Strept. faecalis ATCC 7080

9. : Clostr. perfringens ISS 30543

10. : Clostr. difficile ATCC 9689

11. : Propion, acné ATCC 6919

12. : Neisseria gonorrhoeae L 997 (klinikai izolátum)

13. : Haemophilus influenzae ATCC 19418

14. : Proteus vulgaris X19H ATCC 881

15. : Escherichia coli SKF 12140

16. : Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145

17. : Bacteroides fragilis ATCC 23745

18. : Candida albicans SKF 2270

19. : Mycoplasma gallisepticum Weybridge

tke/ml = telepképző egy ség/ml f. = felett

194 317

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

10