194317. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A40926 antibiotikum komplex és tiszta komponensei, a PA,PB,A,B,BO faktor, valamint ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására

1

194 317

2

lexet kapunk, amely az A 40926 antibiotikum A és B faktorban feldúsult. Ha rövid az az idő, amelyen át a fermentlevet, kivonatot vagy koncentrátumát a bázisos környezetnek kitesszük, olyan A 40926 antibiotikum komplexet kapunk, amely az A 40926 antibiotikum PA és PB faktorban dúsult fel.

Ezért a kitüntetett eljárás az olyan A 40926 antibiotikum komplex előállítására, amely A és B faktorban feldúsult, abból áll, hogy az A 40926 antibiotikum komplex oldatát (amely főként A 40926 antibiotikum PA és PB faktort tartalmaz) szobahőmérsékleten 8-12 órán át állni hagyjuk egy vizes nukleofíl bázisban — pl. vizes ammóniában —, majd az előbbiekben leírt módon izoláljuk a keresett antibiotikum komplexet.

Az A 40926 antibiotikumot tartalmazó oldatokra példák a fermentlevek, extraktumok és az affinitáskromatográfia során eluált frakciók.

Tiszta A 40926 antibiotikumot kaphatunk, ha a nyers komplexet az előbbiekben leírt módon, affinitáskromatográfiával tisztítjuk.

Az így kapott termékre, amely a tiszta faktorokból leszármaztatható biológiai és ftzikokémiaí tulajdonságokkal rendelkezik, a példákban mint A 40926 antibiotikum AB komplexre fogunk hivatkozni.

Egy kitüntetett eljárás egy A 40926 antibiotikum komplex készítmény PA és PB faktorban való dúsítására abból áll, hogy az affinitáskromatográfia során eluált frakciókat gyorsan semlegesítjük egy savval, előnyösen egy ásványi savval, pl. kénsavval vagy sósavval.

A tiszta A 40926 antibiotikum PA és PB faktor elkülönítését ebből a komplexből valamelyik, az előbbiekben ismertetett eljárás szerint végezhetjük.

Egy kitüntetett eljárás fordított fázisú folyadékkromatográfiát jelent, előnyösen saválló acél oszlopban, mérsékelt (5-50 bar) vagy magas (100—200 bar) nyomáson. A szilárd fázis lehet egy szilanizált szilikagél, szénhidrogén fázissal a 2.—18. szénatomon (előnyösen a C 18-on), vagy fenilcsoporttal, és az eluálószer egy előbbiekben meghatározott poláris, vízzel elegyedő oldószer és egy, a gyantával összeférhető pH-jú) előnyösen pH 4—8) vizes puffer elegye.

Az eluciót a szokásos módon követjük, a homogén antibiotikum tartalmú frakciókat összeöntjük és az előbbiekben leírt módon kezeljük, a tiszta vegyületek elkülönítésére, amelyek az alábbi jellemzőkkel rendelkeznek.

Bonyolult HPLC elemzéssel kimutatható, hogy az A 40926 antibiotikum B faktor ténylegesen két, Bq és Bj faktornak elnevezett komponens keveréke.

Az A 40926 antibiotikum Bq faktor - amely az A 40926 antibiotikum B faktornak kb. 90%-át aíkot-Ía - azzal jellemezhető, hogy R+ értéke 1,22, a teitoplanin A2 2. komponenséhez viszonyítva, a B. faktor fizikokémiai jellemzőivel kapcsolatban szereplő D. pont szerinti, a következőkben leírt rendszerben: a B. faktor relatív R értéke pedig - ez az A 40926 antibiotikum B faktor kb. 10%-át képviseli - ugyanebben a rendszerben 1,27.

A tiszta A 40926 antibiotikum BQ faktort az A 40926 antibiotikum B faktor további tisztításával állítjuk elő, pl. oly módon, hogy megismételjük az elkülönítéshez alkalmazott fordított fázisú kromatográfiás eljárást.

Az A 409 és biológiai

26 antibiotikum Bq faktor fizikokémiai jellemezői lényegében azonosak az

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

A 40926 antibiotikum B faktoréival, azzal az eltéréssel, hogy az előbbiekben említett rendszerben végzett HPLC elemzés során csak egy csúcsot mutat (a teikoplanin A2 2. komponenshez viszonyított Rt érték a leírt HPLC rendszerben 1,22). '

Az A 40926 antibiotikum B faktor és az A 40926 antibiotikum Bq faktor között fennálló, az előbbiekben részletezeti hasonlóságok miatt a leírásban és az igénypontokban az A 40926 antibiotikum B faktor biológiai tulajdonságaira való utalásokat úgy kell érteni, hogy azok egyben az A 40926 antibiotikum Bq faktorra is vonatkoznak - amely az A 40926 antibiotikum B faktor fő komponense (kb. 90%-át teszi ki) - és nagy mértékben hozzájárul annak biológiai tulajdonságaihoz.

Egy másik megoldás szerint a találmány szerinti antibiotikumok erős vagy gyenge anioncserélő gyanták — ideértve a funkcionalizált polisztirolt, akrilvagy polidextrán mátrixokat - alkalmazásával különíthetők el a fermentléből vagy tisztíthatók tovább. A gyenge anioncserélők pl. a következő kereskedelmi neveken forgalomba hozott gyanták közül kerülnek^ ki: Dowex MWA-1 vagy WGR (Dow Chemical), Amberlite IRA-73 (Rohm és Haas), DEAE-Sephadex (Pharmacia). A találmány szerinti eljárásban használható erős anioncserélő gyanták pl. a következő kereskedelmi néven forgalomba hozott termékeket foglalják magukban: Dowex MSA-1, SBR, SBR-P (Dow Chemical), Amberlite IR-904 (Rohm és Haas (és OAE-Sephadex (Pharmacia).

A találmány szerinti antibiotikumoknak az eluálását ezekről a gyantákról elektrolitok — pl. nátriumvagy káliumklorid — vizes oldatainak lineáris gradiens elegyeivel végezzük, amelyeket vízzel vagy víz és egy szerves, vízzel elegyedő oldószer — pl. rövidszénláncú alkohol (pl. 1—4 szénatomos alkohol) vagy rövidszénláncú alkil-keton, pl. aceton — elegyeivel állítottunk elő.

Mint már említettük, a találmány szerinti antibiotikumok savas és bázisos funkciókkal rendelkeznek és a szokásos eljárások szerint sókat képeznek.

A találmány szerinti vegyületek jellegzetes, megfelelő savaddiciós sói a szerves és szervetlen savakkal a szokásos reakcióban képződő sókat foglalják magukban. A sóképzéshez pl. a következő savak alkalmazhatók: sósav, hidrogénbromid, kénsav, foszforsav, ecetsav, trifluorecetsav, triklórecetsav, borostyánkősav, citromsav, aszkorbinsav, tejsav, maleinsav, fumársav, palmitinsav, kólsav, pamoinsav, nyálkasav, glutaminsav, kámforsav, glutársav, glikolsav, ftálsav, borkősav, laurinsav, sztearinsav, szalicilsav,, metánszulfonsav, benzolszulfonsav, szorbinsav, pikrinsav, benzoesav, fahéjsav stb.

A sóképzéshez alkalmazható bázisok jellegzetes példái: alkálifém- vagy alkáliföldfém-hidroxiok (pl. nátrium-, kálium- és kalciumhirdoxid), ammónia, és szerves (alifás, aliciklusos vagy aromás (aminok, pl. metilamin, dimetilamin, trimetilamln és a pikolin._________ _ __________ _ _______

Á találmány szerinti szabad amino- vagy nem só formájú vegyületeknek a megfelelő addiciós sókká való átalakítása és a megfordított eljárás (azaz valamely, találmány szerinti vegyület addiciós sójának átalakítása a nem só formájú vagy szabad aminoalakká) a szakember számára kézenfekvő és a találmány kiterjed ezekre az eljárásokra.

Egy találmány szerinti vegyület pl. oly módon ala-6