194317. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A40926 antibiotikum komplex és tiszta komponensei, a PA,PB,A,B,BO faktor, valamint ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
194 317 UV fény, — sárga szín a Pauly reagenssel, azaz cöazotált szuífanii savval (J. Chromatog. 20, 171, 1965 és Z. Physiol. Chem. 292,99,1953),- bloautográfla Bac. subtflls ATCC 6633 alkalmazásával, minimális Davis-f. táptalajon, H)Molekulatömeg kb. 1730 az FAB-MS spektrum alapján, amely az M+H+ csúcsot 1731-nél mutatja, A 40926 antibiotikum Bq faktor, szabad alakban: A) UV abszorpciós spektrum, amely a következő abszorpciós maximumokat mutatja: lambdatnax a) 0,1 N HC1 28r b) pH 7,38 foszfát puffer 281 300 (váll) c) 0,1 N nátrium- vagy káliumhidroxid 300 d) pH 9,0 foszfát puffer 283 300 (váll) e) metanol 282 B) IR abszorpciós spektrum, amely a következő abszorpciós maximumokat mutatja (cm’1 ): 3700-3080, 3080-2700 (nujol), 1720-1625, 1625-1560, 1505, 1460 (nujol), 1375 (nujol), 1295, 1230, 1210, 1150, 1100-1040, 1030, 1015,970, 890,840, 810, 720 (nujol), C) 1H-NMR spektrum, amely a következő jel-csoportokat mutatja (ppm-ben) 270 MHz-nél, DMS0-dtfban (hexadeutero-dimefll-szulfoxid) felvéve, belső standardként (0,00 ppm) TMS-t alkalmazva (delta = ppm): 0,85 (d, izopropfl-metilek), 1,15 (-13H), 1,44 (2H), 2,02 (2H0, 2,32-2,35 (3H0, 4-6,1 (-16H), 6,1-9 (-23H), 8,52, 9,30,9,68 (széles sávok, mozgékony protonok) 2,5—4: interferencia a H20 csúcsok miatt, D) retenciós idő (RJ 1,22 a teikoplanin Aj 2. komponenséhez képest (R. = 20,3 perc) fordított fázisú HPLC-vel a következő körülmények között végezve az elemzést: oszlop: Ultrasphere ODS (5 /urn) Altex (Beckman) 4,6 mm (belső átmérő) x 250 mm, elő-oszlop: Brownlee Labs RP 18 (5 pm) A eluálószer CH3CH 10% pH 6-ra (2,5 g/1) NaH2P04 . H20 90% beállítva B eluálószer: CHjCH 70% pH 6-ra (2,5 g/1) NaH2 P04 . H2 O 30% beállítva eluálás: 5%—60% lineáris grádiens (B eluálószer A eluálószerben), 40 perc alatt, áramlási sebesség: 1,8 ml/perc, UV detektor. 254 nm, belső standard: teikoplanin Aj 2. komponens (Gruppo Lepetit S. p. A.), E) elemanalízis, miután a mintát előzetesen kb. 140°C-on közömbös atmoszférában szárítottuk (tömegveszteség 9,6%), a következő közelítő százalékos összetételt (átlagban) mutatja: szén 54,09%, hidrogén 5,13%, nitrogén 6,34%, klór (összes) 4,12%, klór (ionos) 0,39%, szervetlen maradék 900°C-on levegőn izzítva: 5%. F) sav-bázis Bírálási görbe 4 : 1 arányú 2-metoxl•etanol (MCS) : víz elegyben felvéve, HCl-felesleg hozzáadása után KOH-os Bírálással négy ionizálható funkció jelenlétére mutat, amelyek pkvipo értékei a következők: 4,5, 5,6, 7,2, 9,2, G) RpWfek 0,21, és a teikoplanin Aj 2. komponen-10 20 séhez viszonyított Rf érték 0,53 a következő kromatográfiás rendszerben: 5%-os (tomeg/térf.) Na2S04 70, acetonitril 30, szilanizált szilikagél (60 F234 Merck) lemezeket alkalmazva (rétegvastagság: 0,25 mm), előhívás:- UV fény,- sárga szín Pauly-reagenssel, azaz diazotált szulfanilsawal (J. Chromatog. 20, 171, 1965 és Z. Physiol. Chem. 292,99,1953), ,- bloautográfla Bac. subtflis ATCC 6633 alkalmazásával, Davis-f. minimális táptalajon, H)molekulatömeg kb. 1730, az FAB-MS spektrum .jg alapján, amely az M+H+ csúcsot 1731-nél mutatja, A 40926 anübiotikum PA faktor szabad alakban: • A)UV abszorpciós spektrum, amely a következő abszorpciós maximumokat adja: lambda (nm) a) o.i n Ha m b) 0,1 N KOH 300 c) pH 7,38 foszfát puffer 282 300 (váll) d) pH 9,0 foszfát puffer 283 300 (váll), 25 ß)1? abszorpciós spektrum, amely a következő abszorpciós maximumokat mutatja (cm'1): 3700-3100, 3000-2800 (nujol), 1760-1710, 1655, 1620-1550, 1505, 1460 (nujol), 13675 (nujol), 1260, 1250-950, 845, 805, 720 (nujol), C) 1 H-NMR spektrum, amely a következő jel-csopor- 30 tokát mutatja (ppm-ben), 270 MHz-nél, DMSO-d« -ban )hexadeutero-dimetil-szulfoxid) feltéve, belső standardként (0,00 ppm) TMS-t alkalmazva (delta, ppm): 0,86 (dublettek, CH3), 1,15-1,22 (m, (CH2)_, 1,41 (m, CH2), 2,01 (s, CH3), 2,01 (m, CH2} 35 2,28 (s, N-CH3), 4,26-5,96 (széles, pepfid és aromás CH csoportok), 6,33 —7,73 (aromás CH csoportok és peptid NH csoportok), D) retenciós idő (Rf) 1,15 a teikoplanin Aj 2. komponenséhez képest (R* = 20,3 perc) fordított fázisú HPLC-vel a következő körülmények között végezve az elemzést: oszlop: Ultrasphere ODS (5 pm) Altex (Beckman) 4,6 mm (belső átmérő) x 250 mm, elő-oszlop: Brownlee Labs RP 18 (5 pm), A eluálószer: 45 CH3CN 10% pH6,0-ra (2,5 g/1) NaH2P04 . H2 O 90% beállítva B eluálószer: CH3CN 70% pH 6,0-ra (2,5 g/1) NaH2P04 . H2 0 30% beállítva eluálás: 5%-60% lineáris grádiens (B eluálószer A 50 eluálószerben), 40 perc alatt, áramlási sebesség: 1,8 ml/perc, UV detektor: 254 nm, belső standard: teikoplanin A2 2. komponens (Gruppo Lepeflt S. p. A.), E) Rr érték a teikoplanin Á2 2. komponenshez viszonyítva 0,62 a következő kromatográfiás rendszerben: 5%-os (tömeg/térf.) vizes Na3 S04 70, acetonitril 30, szilanizált szilikagél (60 F2J4 Merck) lemezeket on alkalmazva (rétegvastagság 0,25 mm), w előhívás: 40 55 16
