194317. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A40926 antibiotikum komplex és tiszta komponensei, a PA,PB,A,B,BO faktor, valamint ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 194 317 2- UV fény ,- sárga szín Pauly reagenssel, azaz diazotált szulfanflsawal (J. Chromatog. 20, 171, 1965 és Z. Physiol. Chem. 292,99,1953),- bioautográfia Bac. subtilis ATCC 6633 alkalmazásával, Davis-f. minimális táptalajon, F) molekulatömeg kb. 1758 az FAB-MS spektrum alapján, amely görbe-sereget mutat és a legintenzívebb csúcs 1761-nél látható, az FAB-MS elemzés műveleti körülményei a következők: berendezés: VG Mod ZAB SE, FAB ágyúval (Ion Tech) ellátva, körülmények: pozitív FAB, Xe, gyorsítófeszültség: 8 KV, matrix: tioglicerin-glicerin 1 :1 (térf./térf.), A 40926 antibiotikum PB faktor, szabad alakban: A)UV abszorpciós spektrum, amely a következő abszorpciós maximumokat mutatja: lambdamax(nm) a) 0,1 N Ha 282 b) 0,1 N káliumhidroxid 300 c) pH 87,38 foszfát puffer 282 300 (váll) d) pH 9,0 foszfát puffer 282 300 (váll) B) IR abszorpciós spektrum, amely a következő abszorpciós maximumokat mutatja (cm1 ): 3700-3100, 3000-2800 (nujol), 1760-1710, 1655, 1620-1560, 1605, 1480-1420 (nujol), 1320-1270, 1230-1190, 1150, 1120-920,845, 810, 720 (nujol), C.l) 1 ll-NMR spektrum, amely a következő jel-csoportokat mutatja (ppm-ben) 270 MHz-nél, DMSO-dç-ban (hexadeutero-dimetil-szulfoxid) felvéve, belső standardként (0,00 ppm) TMS-t alkalmazva (delta = ppm): 0,84 (d, izopropfl-metilek), 1,17 (m, (CH2) ), 1,43 (m, CH2), 1,99 (s, CH3), 2,01 (m, CH2), 2,31 (s, N-CH3), 2,79 (duplett-duplett, CH), 3,70 (m, CH), 4,06-6,02 (széles, peptid és aromás CH csoportok), 6,45—7,74 (széles, aromás CH és peptid NH csoportok), 8,19-9,99 (széles, peptid NH és fenolos OH csoportok), C.2) 1H-NMR spektrum, amely a következő jel-csoportokat mutatja (ppm-ben) 270 NHz-nél, DMSO-d6-ban (hexadeutero-dimetil-szulfoxid) + CF3- -COOD-ben, felvéve, belső standardként (0,00 ppm) TMS-t alkalmazva, (delta = ppm): 0,84 (d, izopropfl-metilek), 1,13 (m, (CH2) , 1,40 (m, CH2), 1,98 (s, CH3), 2,00 (m, CH21 2,92 (duplett-duplett, CH), 3,29—3,71 (m, cukor CH csoportok), 4,07—6,09 (s és m, peptid és aromás CH csoportok), 6,45—7,83 (s és m, aromás CH és peptid NH csoportok), 8,17—10,38 (peptid NH és fenolos CH csoportok), D)retenciós idő (R.) 1,27 és 1,32 a teikoplarün A2 2. komponenshez viszonyítva (R^ » 20,3 perc) fordított fázisú HPLC-vel a következő körülmények között végzett elemzés során: 4,6 mm (belső átmérő) x 250 mm elő-oszlop: Brownlee Labs RP 18 (5 pm) A eluálószer'. CHjCN 10% pH 6,0-ra (2,5 g/1) NaH2 P04 . HjO 90% beállítva B eluálóSzer: CH,CN 70% pH 6,0-ra (2,5 g/1) NaH2P04 . H2 0 30% beállítva eluálás: lineáris grádiens (5%—60% B eluálószer A eluálószerben), 40 perc alatt, áramlási sebesség: 1,8 ml/perc, UV detektor: 254 nm, belső standard: teikoplanin A2 2. komponens (Gruppo Lepetit S. p. A.), E) A teikoplanin A2 2. komponenséhez viszonyított Rj érték 0,53 a következő kromatográfiás rendszerben: 5%-os (tömeg/térf.) vizes Na2S04 70, acetonitril 30, szilanizált szilikagél (60 F2S4 Merck) lemezeket alkalmazva (rétegvastagság 0,25 mm), előhívás:- UV fény,- sárga szín Pauly reagenssel, azaz diazotált sZulfanilsawal (J. Chromatogr. 20, 171, 1965 és Z. Physiol. Chem. 292,99,1953),- bioautográfia Bac. subtilis ATCC 6633 alkalmazásával Davis-f. miminális táptalajon, F) molekulatömeg kb. 1772 az FAB-MS spektrum alapján, amelyen több csúcs látható, a legintenzívebb 1776-nál, a FAB-MS elemzés műveleti körülményei a következők: berendezés: VG Mod ZAB SE, FAB ágyúval (Ion Tech) ellátva körülmények: pozitív FAB, Xe, gyorsító feszültség 8 KV, matrix : tioglicerin-glicerin 1 (1) térf. (térf.) -azzal jellemezve, hogy az Actinomadura sp. ATCC 39727 törzset vagy annak egy A 40926 antibiotikumot termelő mutánsát vagy variánsát süllyesztett aerób körülmények között tenyésztjük asszimilálható szén- és nitrogénfonás és szervetlen sók jelenlétében, az antibiotikumot a fermentléből ldnyeijük és az egyes komponenseket kívánt esetben elkülönítjük, és kívánt esetben a kapott vegyületet sóvá alakítjuk. (Elsőbbsége: 1985. 10.10.) 2. Eljárás A 40926 antibiotikum komplex, az A ^0926 antibiotikum A faktor, az A 40926 antibiotikum B faktor, valamint ezek keverékei és addiciós sói előállítására, amelyek a következő tulajdonságokkal rendelkeznek: A 40926 antibiotikum A faktor szabad alakban: A)UV abszorpciós spektrum, amely a következő abszorpciós maximumokat mutatja: lambdamax (nm> a) 0,1 N HQ 281 b) pH 7,38 foszfát puffer 281 300 (váll) c) 0,1 N nátrium- vagy káliumhidroxid 300 d) metanol 282 e) pH 9,0 foszfát puffer 282 B) IR abszorpciós spektrum, amely a következő abszorpciós maximumokat mutatja (cm"1 ): 3700-3100, 3100-2800 (nujol), 1655, 1620- 1560, 1510, 1480-1410 (nujol), 1375 (nujol), 1320-1250, 1250-1190, 1100-950 , 845 , 810, 720 (nujol), C) 1 H-NMR spektrum, amely a következő jelcsoportokat (ppm-ben) mutatja 270 MHz-nél DMSO-d6- ban (hcxadeutero-dimetilszulfoxid) felvéve, belső standardként (0,00 ppm) TMS-t alkalmazva (delta = ppm): 5 10 15 2C 25 30 35 40 45 50 55 60 17
