194317. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A40926 antibiotikum komplex és tiszta komponensei, a PA,PB,A,B,BO faktor, valamint ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 2 194 317 1250, 1250-1190, 1100-950,845,810,720 (nui°i)> C) *H-NMR spektrum, amely a következőjelcsoportokat (ppm-ben) mutatja 270 MHz-nél DMS0-d4- ban (hexadeutero-dimetilszulfoxid) felvéve, belső standardként (0,00 ppm) TMS-t alkalmazva (delta = ppm), 0,86 (triplettek, 6H), 1,21 (-11H), 1,43 (2H), 2,01 (2H), 2,31-2,34 (3H), 4-6,2 (-16H), 6,2- 8 (-23H), 8,44, 9,22, 9,66 (széles sávok, mozgé? kony protonok), 2,5—4: Interferencia a H2 O csúcsokkal, D) retenciós idő (R.) 1,12 a teikoplanin A2 2. komponenséhez viszonyítva (Rt = 20,3 perc) fordított fázisú HPLC-vel a következő körülmények kö. ott végezve az elemzést: oszlop: Ultrasphere ODS (5 /am) Altex (Beckman) 4,6 mm (belső átmérő) x 250 mm elő-oszlop: Brownlee Labs RP (5 pm) Az eluálószer CH3CN 10% pH 6-ra (2,5 g/1) NaH2 P04 . H2 0 90% beállítva B eluálószer: CH3CN 70% pH 6,0-ra (2,5 g/1) NaH2 P04 . H2 O 30% beállítva eluálás: 5%—60% lineáris grádiens (B eluálószer az A eluálószerben), 40 perc alatt, áramlási sebesség: 1,8 ml/perc, UV detektor: 254 nm, belső standard: teikoplanin A2 2, komponens (Gruppo Lepetit S. p. A.), ugyanilyen körülmények között a tesztoszteronhoz (Roussel Uclaf) viszonyított retenciós idő 0,60, E) elemanalízis, miután a mintát előzetesen kb. 140°C-on közömbös atmoszférában szárítottuk (tömegveszteség 4,6%), amely a következő közelítő (százalékos) összetételt mutatja (átlag): szén 55,82, hidrogén 5,17, nitrogén 6,31, klór (összes) 4,24%, klór (ionos) 0,37%, szervetlen maradék 900°C-on levegőn való izzítás után: 1,2%. F) sav-bázis titrálási görbe: 4 : 1 arányú 2-metoxi-etanol (MCS) : víz elegyben, HQ fölösleg hozzáadása után KOH-dal végzett titrálással felvéve, amely a következő pk^jpc értékekkel rendelkező négy izonizálható funkció jelenlétére mutat: 4,6, 5,6, 7,2,9,2, G) az Rr érték 0,24 és, a teikoplanin A2 2. komponenséhez viszonyítva 0,70 értékű Rj- a következő kromatográfiás rendszerben: 5% (tömeg/térf.) vizes Na2 S04 70, acetonitril 30, szilanizált szilikagé] (60, F2S4, Merck) lemezeket a’kamazva (rétegvastagság 0,25 mm) előhívás:- UV fény,- sárga szín Pauly reagenssel, azaz diazotált szulfanflsawal (J. Chromatogr. 20, 171, 1965 és Z. Physiol. Chem. 292,99,1953),- bioautográfla Bac. subtills ATCC 6633 felhasználásával, Davis-f. minimális táptalajon, H) molekulatömeg kb. 1716 az FAB-MS spektrum alapján, amely szerint az M*H* csúcs 1717-nél helyezkedik el, A 40926 antibiotikum B faktor, szabad alakban: A)UV abszorpciós spektrum, amely a következő 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 abszorpciós maximumokat mutatja: lambda^ (nm) a) 0,1 N HQ b) pH 7,38 foszfát puffer 281 300 (váll) c) 0,1 N nátrium- vagy káliumhidroxid 300 d) pH 9,0 foszfát puffer 283 300 (váll) e) metanol 282 B) ÍR abszorpciós spektrum, amely a következő abszorpciós maximumokat mutatja: (cm'1 ): 3700-3080, 3080-2700 (nujol), 1720-1625, 1625-1560, 1505, 1460 (nujol), 1375 (nujol), 1295, 1230, 1210, 1150, 1100-1040, 1030, 1015, 970, 890, 810,720 (nujol), C) 1H-NMR spektrum, amely a következő jel-csoportokat mutatja (ppm-ben) 270 MHz-nél, DMSO-d*ban (hexadeutero-dimetilszulfoxid) felvéve, belső standardként (0,00 ppm) TMS alkalmazásával (delta = ppm): 0,85 (d, izopropil-metilek), 1,15 (-13H), 1,44 (-2H), 2,02 (2H), 2,32-2,35) (3H), 4-6,1 (-16H), 6,1-8 (-23H), 8,52, 9,30,9,68 (széles sávok, mozgékony protonok), 2,5-4: interferencia a H2 O csúcsok hatására, D) retenciós idő (R.) 1,22 és 1,27 a teikoplanin A2 2. komponenséhez viszonyítva (R. = 20,3 péíc) fordított fázisú HPLC-vel a következő körülmények között vizsgálva: oszlop: Ultrasphere ODS (5 jum) Altex (Beckman) 4,6 mm (belső átmérő) x 250 mm elő-oszlop: Brownlee Labs RP 18 (5 /um), -A eluálószer: CH3 10% pH 6-ra (2,5 gfl) NaH2P04 . H20 90% beállítva, B eluálószer: 'CH3CN 70% pH 6,0-ra (2,5 gfl) NaH2 P04 . H2 O 30% beállítva eluálás: 5%-60% lineáris grádiens (B eluálószer az A eluálószerben), 40 perc alatt, áramlási sebesség: 1,8 ml/perc, UV detektor: 254 nm, belső standard: teikoplanin A2 2. komponens (Gruppo Lepetit S. p. A.), E) elemanalízis, miután a mintát előzetesen kb. 140°C-on közömbös atmoszférában szárítottuk (tömegveszteség 9,6%) a következő közelítő százalékos összetételt (átlag) mutatja: szén 54,09, hidrogén 5,13, nitrogén 6,34, klór (összes) 4,12%, klór (ionos) 0,39%, szervetlen maradék 900°C-on levegőn való izzítás után: 5%, F) sav-bázis titrálási görbe, 4 : 1 arányú 2-metoxi-etanol (MCS) : víz elegyben felvéve, HG felesleg (pH 2,7) hozzáadását követő KOH-os titrálással a következő pkw^g értékekkel rendelkező négy funkció jelenlétére mutat: 4,5, 5,6, 7,2,9,2, G) Rf érték 0,21, és a teikoplanin A, 7 komponenséhez viszonyított Ráérték 0,53 a Következő kromatográfiás rendszerben: 5%-os (tömeg/térf.) vizes Na2 S04 70, acetoriiíril 30, szilanizált szilikagél (60 F254 Merevlemezeket alkalmazva (rétegvastagság 0,25 mm), előhívás: 15
