194315. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új szénhidráttartalmú antibiotikumok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 194 315 2 g nyers AT 2433 B-t, azaz AT 2433 Bj és B2 keveréket kapunk. C) A nyers AT 2433 A oszlopkromatografálása Egy 2 cm belső átmérőjű és 30 cm magas Glenco oszlopot 37 g Woelm kovasavgél (0,060-0,200 mm) kloroformos szuszpenzlójával töltünk meg. Az oszlop tetejéről egy 4 cm-es kovasavgél réteget leveszünk, és a nyers AT 2433 A ( 1,7 g) 200 ml, 2 rész kloroformot és 1 rész metanolt tartalmazó eleggyel készült oldatához adjuk. Az oldószert vákuumban forgó bepárlóban lepároljuk. A kapott élénk sárga port kloroformmal elkeveijük, és az oszlop tetejére visszük. Az oszlopot 300 ml, ammónium-hidroxiddal telített kloroform átszivatásavai hozzuk egyensúlyba (1 térfogat% tömény ammónium-hidroxid — 99 térfogat% ldoroform, alsó fázis). Az eluciót 2 1, ammónium-hidroxiddal telített kloroform lineáris gradiensével kezdjük (1 térfogat% ammónium-hidroxidot adva hozzá), és 21 ml/perc átfolyási sebességnél 40 frakciót szedünk. Az eluátumot 405 nm-nél vizsgáljuk. A 31—34. frakciókat összeöntjük és vákuumban, forgó bepárlóban szárazra pároljuk. A maradékot 50 ml, 2 rész kloroformot és 1 rész metanolt tartalmazó elegyben oldjuk. Az oldatot nagyon lassan 1700 ml, gyorsan kevert Skellysolve B-hez adjuk. A kivált csapadékot szűréssel összegyűjtjük, így 697,5 mg homogén AT 2433 A-t kapunk, amely az AT 2433 Aj és A2 elegye, és nem tartalmaz AT 2433 Bj -t és B2-t. D) A nyers AT 2433 B oszlopkromatografálása Egy 2 cm belső átmérőjű és 30 cm magas Glenco oszlopot 37 g Woelm kovasavgél, (0,032-0,63 mm) kloroformos szuszpenziójával töltünk meg. Az oszlop tetejéről egy 2 cm-es kovasavgél réteget eltávolítunk, és 500 mg nyers AT 2433 B, amely AT 2433 B| és Bj elegye, 50 ml, két rész kloroformot és 1 rész metanolt tartalmazó eleggyel készült oldatához adjuk. Az oldószert vákuumban, forgó bepárlóban eltávolítjuk. Az élénk sárga impregnált kovasavgélt kloroformban szuszpendáljuk, és az oszlop tetejére visszük. Az oszlopot tömény ammónium-hidroxiddal (1 térfogat%) telített kloroformmal hozzuk egyensúlyba. Az eluációt 2 liter, ammóníum-lűdroxiddal telített kloroform lineáris gradiensével végezzük (1 térfogat% tömény ammónium-hidroxidot adva hozzá) és 16, megközelítőleg 100—100 ml-es frakciót szedünk. Az eluátumot 405-néI vizsgáljuk. A kromatogram alapján a kővetkező frakciókat képezzük: 1. 0- 1218 ml, 2. 1219-1746 ml, 3. 1765-2000 ml. A 2. frakciót vákuumban, forgó bepárlóban szárazra pároljuk. A maradékot 5 ml, 2 rész kloroformot és 1 rész metanolt tartalmazó elegyben oldjuk. Az oldatot 1 liter, nagyon gyorsan kevert Skellysolve B-be öntjük. A kivált csapadékot szűréssel összegyűjtők, így 454 mg homogén AT 2433 b-t, az AT 2433 Bi és B2 keverékét kapjuk, amely AT 2433 At -t és Á2-t nem tartalmaz. 3. példa Az AT2433 A t és Aj elválasztása A) egy 2,65 cm belső átmérőjű és 60 cm magas Glencö oszlopot 0,040 mm átlagos szemcseméretű Baker C-IR kovasavgél (oktadecil-szilánnal kezelt kovasavgél) motanolos szuszpenziójával töltünk meg. Az oszlopot közepes nyomású folyadékkromatográfiás rendszerbe kapcsoljuk, és 4 rész acetonltrilt, 3 rész metanolt és 3 rész. 0,1 mólos ammónium-acetátot tartalmazó elegy 600 mi ével hozzuk egyensúlyba. A 2C) példában kapott AT 2433 A 360 mg-ját 1 ml dimetflszulfoxidban a mintatartóba visszük és az eluálószerrel az oszlopra szivatjuk. Az eluciót megkezdjük, és az eluátumot 405 és 435 nm-nél vizsgáljuk. Megközelítőleg 50 ml-es frakciókat szedünk kb. 10 ml/ perc-es átfolyási sebességnél. Az eluciós kromatogram alapján a 12-16. frakciókat egyesítve az 1. és a 17-24. frakciókat egyesítve a 2. frakciót kapjuk. A kromatografálást négy alkalommal megismételjük a 2C) példában kapott AT 2433 A újabb mennyiségeinek felhasználásával (a 2. menetben 100 mg, a 3-ban 167 mg, a 4.-ben 160 mg és az 5.-ben 188 mg anyagot kromatografálunk. (Mind az 5 menet 1. frakcióját összeöntjük és 1000 ml kloroformmal extraháljuk. Az extraktumot (az alsó fázist) szárazra pároljuk, és így nyers AT 2433 A2-t kapunk. Minden menet 2. frakcióját külön dolgozzuk fel. A frakciókat 500 ml kloroformmal extraháljuk. Az extraktumot (alsó fázis) szárazra pároljuk, a maradékot 2 ml, 2 rész kloroformot és 1 rész metanolt tartalmazó elegyben oldjuk. Ezt az oldatot gyors keverés közben 500 ml Skellysolve B-hez adjuk. A kivált csapadékot szűréssel összegyűjtük, így AT 2433 A, -t kapunk. B) Egy 1,65 cm belső átmérőjű és 60 cm magas Glanco oszlopot Baker C-18 kovasavgél metanolos szuszpénziójával töltünk meg. Az oszlopot közepes nyomású folyadékkromatográfiás rendszerbe kapcsoljuk, és a fentebb említett eluálószerrel hozzuk egyensúlyba. A 3 A) példában kapott nyers AT 2433 Á2-t 1 ml dimetil-szulfoxidban oldjuk. Az oldatot a 15 ml-es mjntatartóba visszük, és onnan az oszlopra szívatjuk. Az eluciót megkezdjük, és körülbelül 50 ml-es frakciókat szedünk. Az eluátumot 405 és 435 nm-nél ISCO UV-detektorral vizsgáljuk. A kapott kromatogram alapján a 16—28. frakciókat egyesítjük, és 1000 ml kloroformmal extraháljuk. Az alsó (kloroformos) fázist elválasztjuk és vákuumban, forgó lepárlóban szárazra pároljuk. A maradékot 5 ml, 2 rész kloroformot és egy rész metanolt tartalmazó elegyben oldjuk. Ezt az oldatot gyors keverés közben 500 ml Skellysolve B-be öntjük. A kivált csapadékot szűréssel összegyűjtük, így AT 2433 A2-t kapunk. Az AT 2433 Aj és AT 2433 A2 fizikai és kémiai tulajdonságait a VII. és VIII. táblázatban foglaljuk össze: VII. táblázat AT 2433 At : olyan 0) általános képletű vegyület, amelyben X klóratomot és R metilcsoportot jelent. Leírás: sárga amorf szilárd anyag vagy finom tűs kristály anyag összegképlet: C34H35QN09 Molekulasúly. 679,17 Kémiai ionizációs tömegspektrometriás módszerrel meghatározva, rcaktáns gázként metánt használva (CIMS-CH«) UV-spektrum: lambda (c 0,02290 g/1, CII3OII) A mért maximumok es elnyelések (zárójelben) * 200 nm (45.5), 235 run (5S.9), 283 nm (50.6), 316 nm (67.2), 395 nm (5.7) IR-spektrum: lambda (KBr): 3425, 3362, 2940, 1696, 1581, 1475, 1462, 1442, 1382, 1335, 1277,1242,1194,1128,1078,1052, 768, 759 cm'1. 1H NMR-spektrum (360 MHz): A mért kémiai elto-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 10
