194310. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új TAN-588 antibiotikum alkálifém-, alkáliföldfém-, ammóniumsójának és N-dezacetilezett-származékának előállítására
1 194 310 2 len, 48 órán át rázatva inkubáljuk. Az ilymódon kapott folyékony tenyészetet ezután egy 200 1 térfogatú femientor tartályban lévő 120 1 táptalajba oltjuk át. A táptalaj összetétele a fentivel megegyező, 0,05 v% Aetcol márkanevű habzásgátlóval kiegészítve. Az lnkubálás folyamán a tenyészetet 28°C hőmérsékleten tartjuk., 120 1/perc levegőárammal levegőztetjük és 180 fordulat/perc sebességű keverővei kevertetjük 48 órán át. A kapott 120 1 tenyészetet egy 6000 1 térfogatú fennentor-tartályban lévő 4000 1 táptalajba oltjuk át. A táptalaj egy vizes oldat (pH beállítás nélkül) és összetétele a következő: 3 v% dextrin, 3,0 /ív nyers szójallszt, 0,2 v% Polypepton, kiegészítve 0,05 v% Aetcol habzásgátlóval. Az lnkubálás folyamán a tenyészetet 22SC hőmérsékleten tartjuk, 4000 1/perc levegőárammal levegőztetjük és 120 fordulat/pcrc sebességű keverővei kevertetjük 66 órán át. A kapott folyékony tenyészetet Hylfo Super Cel. szűrőközeget használva leszűrjük. A 4360 1 szürietet 400 1 Amberlite 1RA-402 (Cl típus) hordozóval töltött oszlopon kromatogratáljuk. Az oszlopról az antibiotikumot 2000 1 2 v% vizes nátrium-klorid oldattal eluáljuk és az eluátumot 160 1 aktívszénnel töltött oszlopon kroinatografáljuk. Az oszlopról az antibiotikumot 640 1 8 v% izo-butanollal eluáljuk, majd 40 ! Amberlite 1RA-68 (Cl típus) hordozóval töltött oszlopon kroinatografáljuk. Az eluálást 1 v% vizes nátrium-klorid-oldattal végezzük. A kapott 200 1 eluátumot 80 1 aktívszénnel töltött oszlopon ismét kromalografáljuk. Az antibiotikumot eluáláshoz 8 v% vizes izo-butanol-oldatot használunk. A 400 1 eluátumot vákuum alkalmazásával bepároljuk, majd liofílizáljuk. A lioíllizált terméket acetonnal kezeljük 620 g TAN-588 nátriumsót kapunk, csapadék formájában. Nagynyomású folyadékkromatográfiás analízis alapján megállapítottuk, hogy a poralakú termék 57%-a TAN-588 nátriumsó. 5 g port feloldunk vízben, majd a kapott oldatot 200 ml OAE-Sephadex (Cl típus) hordozóval töltött oszlopon kromatografáljuk. Az eluáláshoz 0,03 mólos vizes nátrium-klorid-oldatot használunk. 1,2 1 összegyűjtött aktív anyagot tartalmazó frakciót 500 1 aktívszénnel töltött oszlopon sótalanítunk. Az eluátumot koncentráljuk, majd liofílizáljuk. 2,5 g TAN-588 Na-sót kapunk, fehér por formájában. A kapott termék vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatában kapott Rf érték, valamint a nagynyomású folyadékkromatográfiás vizsgálatban és IR-, UV-, CD- és NMR-spektrumában kapott Rt érték alapján megállapítható, hogy a termék az 1. példa szerinti eljárással előállított TAN-588-nátriumsóval megegyező. 4. példa Empedobacter lactamgenus YK-258 (IFO 14322, FERM BP-699) szilárd táptalajon tenyésztett törzset, 2 1 térfogatú Sakaguchi edényben lévő 500 ml táptalajra oltunk be. A táptalaj egy vizes oldat (pH 7,0) és összetétele a következő: 2 v% glükóz, 3 v% oldható keményítő, 1 V% nyers szójallszt, 0,5 v% Polypepton és 0,3 v% nátrium-klorid kiegészítve 0,5 v% précipitait kálcium-karbonáttal. Az edényeket 24°C hőmérsékleten 48 órán át rázatva inkubáljuk. Az ilymódon kapott folyékony tenyészetet ezután egy 50 1 térfogatú fermentor tartályban lévő 30 1 táptalajra oltjuk rá. A táptalaj összetétele a fentivel megegyező. 0,05 v% Aetcol márkanevű habzásgátlóval kiegészítve. Az lnkubálás folyamán a tenyészetet 24°C hőmérsékleten tartjuk, 50 1/perc levegőárammal levegőztetjük és 200 fordulat/perc sebességű keverővei 48 át kevertetjük. A kapott 6 1 tenyészetet egy 200 1 térfogatú fermentor-tartályban lévő 120 1 táptalajba oltjuk át. A táptalaj egy vizes oldat (pH 6,5) és összetétele a következő: 3 v% dextrin, 1,5 v% nyers szójaliszt, 1,5 v% kukoricasikér-liszt, 0,2 v% Polypepton és 0,1 v% nátriumtioszulfát, kiegészítve 0,05 v% Aetcol habzásgátlóval. Az lnkubálás folyamán a tenyészetet 17°C hőmérsékleten tartjuk, 200 1/perc levegőárammal levegőztetjük és 150 fordulat/perc sebességű keverővei 24 órán át kevertetjük. A kapott tenyészetet Pseudomonas aeruginosa C-141 alkalmazásával vékonyréteg-kromatográfiás bioautográfiás módszerrel vizsgálva megállapítottuk, hogy az N-dezacetilezett TAN-588 antibiotikum (A és B típus keveréke). Nagynyomású folyadékkromatográfiás vizsgálat: készülék: 6000/A/660/440 (gyártó cég: Waters Assoc. USA), oszlop: YMS-Pack A 312 (gyártó cég: Yamamura Chein. Láb., Japán), mozgó fázis: 0,01 m foszfát-puffer pH 6,3) Rt = 3,1 és 3,3 perc. 5. példa Lysobacter albus sp. nov. YK-422 (IFO 14384 FERM BP-698) szilárd táptalajon tenyésztett törzset. 2 1 térfogatú Sakaguchi edényben lévő 500 ml táptalajra oltunk be. A táptalaj egy vizes oldat (pH 7,0) és összetétele a következő: 2 v% glükóz, 3 v% oldható keményítő, 1 v% nyers szójaliszt, 0,5 v% Polypepton és 0,3 v% nátrium-klorid, kiegészítve 0,5 v% précipitait kálcium-karbonáttal. Az edényeket 24°C hőmérsékleten 48 órán át rázatva inkubáljuk. Az ilymódon kapott folyékony tenyészetet ezután egy 50 1 térfogatú fermentor tartályban lévő 30 1 táptalajra oltjuk át. A táptalaj összetétele a fentivel megegyező, 0,05 v% Aetcol márkanevű habzásgátlóval kiegészítve. Az lnkubálás folyamán a tenyészetet 24°C hőmérsékleten tartjuk, 50 1/perc levegőárammal levegőztetjük és 200 fordulat/perc sebességű keveiővel 48 órán át kevertetjük. A kapott 6 1 tenyészetet egy 200 1 térfogatú fermentortartályban lévő 120 1 táptalajba oltjuk át. A táptalaj egy vizes oldat (pH 6,5) és összetétele a következő: 3 v% dextrin, 1,5 v% nyers szójaliszt, 1,5 v% kukoricasikér-liszt, 0,2 v% Polypepton és 0,1 v% nátrium-tioszulfát, kiegészítve 0,05 v% Aetcol habzásgátlóval. Az inkubálás folyamán a tenyészetet 17 C hőmérsékleten tartjuk, 200 1/perc levegőárammal levegőztetjük és 150 fordulat/perc sebességű keverővei 24 órán át kevertetjük. A tenyészetet Pseudomonas aeruginosa C-141 alkalmazásával vékonyréteg kromatográfiás bioautográfiás módszerrel vizsgálva megállapítottuk, hogy az N-dezatelezett TAN-588 (A és B típus keveréke). Rt-értéke a 4, példa szerint előállított N-dezactilezett TAN-588 antibiotikum Rt-értékével azonos. 6. példa Empedobacter lactamgenus YK-258 (IFO 14322, FERM BP-699) szilárd táptalajon tenyésztett törzset, 2 1 térfogatú Sakaguchi edényben lévő 500 ml táptalajra oltunk be. A táptalaj egy vizes oldat (pH 7,0) és összetétele a következő: 2 v% glükóz, 3 v% oldható 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 10
