194304. lajstromszámú szabadalom • Eljárás immobilizált enzim aktivitásának szintentartására
1 194 304 2 A fenti példák egy előnyösen alkalmazható enzimrendszerre vonatkoznak, de a szakember minden különösebb nehézség nélkül más enzlm/hordozó kombi nációt is kiválaszthat, mely a találmány szerinti el 5 járás során jó eredménnyel felhasználható. Az alábbi táblázat (Handbook of enzyme biotechnology, first published In 1985, Ellis Hozwood Limited) néhány működőképes enzlm/hordozó kombinációt Ismertet. Hordozó Anion cserélők DEAE-cellulóz AE-ceDulóz TEAE-cellulóz _ DEAE-Sephadex® OAE-Sephadex® DEAEAmberlite:: IRA 93 Amberlite® IRA 94 Amberlite® IRA 910 Amberlite® IRA 938 Kation cserélők CM-cellulóz Cellulóz foszfát CM-Sephadex, SP-Sephadex® Dextran szulfát Amberlite® IRC-50 Amberlite® IRC 200 Ionos kötéssel előállított immobilizált enzimek Enzim Glükoamfláz (EC3.2.1.3) Foszfodiészteráz (EC 3.1.4.1) D-glükóz-izomeráz (EC 5.3.1.18) Inulináz (EC 3.2.1.7) Metanol oxidáz i Dextranszukráz (EC 2.4.1.5) Aminoaclláz (EC 3.5.1.14) ' Korldazon dihidrodlal dehídrogenáz A és B D-glükóz-izomeráz (EC 5.3.1.18) Pullulanáz (EC 3.2.1.41) D-glükóz-izomeráz (EC 5.3.1.18) Fenol 2-monooxigenáz (EC 1.14.13.7) Dextranszukráz (EC 2.4.1.5) /3D-fruktofuranozidáz (EC 3.2.1.26) Hexokináz (EC 2.7.1.1) Kreatin kináz (EC 2.7.3.2) Karbamofl foszfát szintetáz (EC 6.3.4.16/6.3.5.5) Fenol 2-monooxlgenáz (EC 1.14.13.7) D-glükóz oxidáz (EC 1.1.3.4) j3-D-fruktofuranozidáz (EC 3.2.1.26) D-glükóz óxidáz (EC 1.1.3.4) D-glükóz oxidáz (EC 1.1.3.4) Penicillin amidáz (EC 3.5.1.11) Amlnoacű-tRNA szintetázok /3-D-fruktofuranozidáz (EC 3.2.1.26) Dextranszukráz (EC 2.4.1.5), Glükoarpiláz (EC 3.2.1.3) Laktát dehidrogenáz (EC 1.1.1.27) Koleszterol oxidáz (EC 1.1.3.6( /3-D-fruktofüranozidáz (EC 3.2.1.26) Oltóenzim Irodalom Maeda et al. (1979) Aukati et al. (1978) Huitron Limon-Lason (1978) Guiraud et al. (1981) Barrati et al. (1978) Kaboli Reüly (1980) Szwajcer et al. (1981) KeDerétal. (1979) Huitron Limon-Lason (1978) Ohba et al. (1978) Huitron Limon-Lason (1978) Kjellén Neujahr (1979 1980) Kaboli Reilly (1980) Woodward Wiseman (1978) Miura et al (1979) Miura et al. (1979) Miura et al. (1979) Kjellén Neujahr (1979 1980) Klei et al. (1978) Ooshima et al. (1980) Kiel et al. (1978) Kiel et al (1978) Carleysmith et al (1980) Yamada (1978) Woodward Wisemann (1978) Kaboli Reüly (1980) Adachi et al. (1978) Klinov et al. (1979) Cheetham (1979) Ooshima et al. (1980) Gouges et al. (1979) SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás Immobilizált enzim aktivitásának szintentartására valamely reaktorban, azzal jelle- 45 m e z v e, hogy a) szilárd hordozóanyagon az adszorpció körülményei között az enzim olyan mennyiségét adszorbeáljuk, amely az aktivitás egy előre meghatározott szintjét képviseli és ez kisebb a hordozóanyag legnagyobb felvevőképességénél, 50 b) az enzlmaktívitást folyamatosan ellenőrizzük, és c) további enzimmmenylségeket adszorbeálunk a hordozóanyagon az előre meghatározott aktivitásszint fenntartására, mihelyt - a mérés alapján — az előzőleg adszorbeált enzim aktivitása az előre mégha- 55 tározott szint alá csökken. 2. Az 1. Igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy hordozóanyagként gyengén bázisos anioncserélő adszorbenst használunk. 3. A 2. Igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy gyengén bázisos anioncserélő ou adszorbensként sztriol-divinfl-benzol kopolimert, polisztirol-fenol gélt, polisztirol-poliamin gélt, dietil-amlno-etil keresztkötéses dextrán-ágy gélt vagy dietll-amino-etil cellulóz gélt használunk. 4. A 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy szDárd hordozóként dietÜ-amlno-etll keresztkötéses dextrán-ágy gélt vagy dletD-amlno-etll cellulóz gélt használunk. 5. Az 1-4. Igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a hordozóanyag legnagyobb felvevőképességének 1-90%-át kitevő enzimmennyiséget alkalmazunk. 6. Az 5. Igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az említett felvevőképesség 10-50%-ának megfelelő enzimmennyiséget alkalmazunk. 7. A 6. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az említett felvevőképesség 25%ának megfelelő enzimmennyiséget alkalmazunk. 8. Az 1-7 Igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az enzimaktivitást úgy ellenőrizzük, hogy szabályos időközök-7
