194281. lajstromszámú szabadalom • Kémiai eljárás az L 17392 antibiotikum (deglukoteikoplamin) és savaddíciós sói előállítására
1 194.281 2 mossuk. Ezt a terméket víz/acetonitril 80:20 (téri./ térf.)r arányú keverékében átkristályosítjuk és az így nyert kristályos szilárd anyagot szűréssel összegyűjtjük, dietil-éterrel mossuk és végül vákuum (2 Hgmm 267 Pa) alatt szárítjuk három napig, 0,55 g kristályos tiszta deglükoteikoplanint nyerte, amelynek fiziko-kémiai jellemzői azonosak voltak a korábban leírtakkal. A deglükoteikoplanin sósavas sóját a következő eljárás szerint készítjük: 130 mg-os adag kristályos tiszta deglükoteikoplanint szuszpendálunk 10 ml acetonitril/víz 2:3 (térf./ térf.) arányú keverékben, és 0,2 ml ln HC1 oldatot adunk hozzá. 15 ml n-butanol hozzáadása után az így létrejött oldatot 2 mire koncentráljuk csökkentett nyomáson (20 Hgmm l,67.103Pa), 40°Chőmérsékleten. A szilárd csapadékot, amely 10 ml dietil-éter hozzáadása után képződik, összegyűjtjük, dietil-éterrel mossuk a szűrőn és vákuum alatt 50°C hőmérsékleten szárítjuk egy éjszakán át. Kitermelés: 107 mg deglükoteikoplanin hidroklorid. 2. példa * Deglükoteikoplanin készítése az L 17046 antibiotikumból a.) Az L 17046 antibiotikum előállítása Az L 17046 antibiotikumot úgy állítjuk elő,hogy 10 g teikoplanin komplexet (azaz olyap antibiotkum komplexet, amely teichomidn Aj, Á2 és A'3 alkotórészeket tartalmaz és amelyet az ATCC 31121 törzs fermentációjával nyertek, a 4,239,751 lajstromszámú amerikai egyesült államok-beli szabadalmi leírás szerint) savas hidrolízisnek vetjük alá, 150 ml In HCl-t alkalmazva 80°C hőmérsékleten, 45 percen át, keverés mellett. Ezután a keveréket 0—5°C hőmérsékletre lehűtjük és 37%-os sósavoldatot (30 ml) adunk hozzá. A keverést kb. 10 percen át fenntartjuk, ez után akicsapódott szilárd anyagot szűréssel kinyerjük, 20 ml 2n HCl-el, majd etil-éterrel mossuk és egy éjszakán át szántjuk kálium-hidroxid szemcsék fölött szobahőmérsékleten, így 8,3 g nyers L 17046 antibiotikum hirokloridot nyerünk. Ennek a terméknek egy részletét (6,2 g) feloldjuk 80%-os vizes metanolban (500 ml) és szilikagélt (30 g, 0,06—0,2 mm, Merck) adunk hozzá, n-butanol (200 ml) hozzáadása után az oldószert vákuumban eltávolítjuk. A maradékot ezután szilikagél kromatográfiás oszlopra visszük (300 g, 0,06-0,2 mm, Silicagel 60 Merck) acetonitril ben. Az oszlopot egymás után a következő oldószer-keverékekkel fejlesztjük ki: acetonitril 300 ml acetonitril/víz 95:5 (térf./térf.) 300 ml acetonitril/víz 90:10 (térf./térf.) 300 ml acetonitril/víz 85:15 (térf./térf.) 300 ml Az eluált frakciókat elöntjük, az oszlopot pedig acetonitril/víz lineáris-lépcsőzetes gradienssel fejlesztjük ki 357 ml/óra sebességgel, a gradiens acetonitril/ víz 85:15 (térf./térf.)-tol 70:30-ig terjed. 25 ml-es frakciókat szedünk és HPLC-vel megvizsgáljuk ezeket. Azokat a frakciókat, amelyek L 17046 antibiotikumot tartalmaznak (170- 200. frakciók) egyesítjük, n-butanolt (400 ml) adunk az összegyűjtött frakciókhoz és az így kapott keveréket kis térfogatra koncentráljuk. Ezután acetont adunk a zavaros oldathoz és kb. 10°C hőmérsékletre hűtés után, csapadék kezd keletkezni. Néhány óra múlva a csapadékképződés teljessé válik, ekkor a szilárd anyagot szűréssel összegyűjtjük, acetonnal mossuk és szobahőmérsékleten vákuum alatt szárítjuk. 1,9 g lényegében tisz- ' ta L 17046 antibiotikumot nyerünk, amelynek jellemzői a következők: a. ) fajlagos forgatása (a) £>0 = -44°C ( c = 1%, dime til-formamid (DMF). b. ) könnyen oldódik vízben pH > 8 értéken, valamint dimetil-formamidban, dimetil-szulfoxidban, propilénglikolban és metil-celloszolvban, gyengén oldódik metanolban, csaknem oldhatatlan n-hexánban, dietil-éterben és acetonban, c. ) ultraibolya abszorpciós spektruma a következő abszorpciós maximumokat mutatja,- 0,In sósavoldatban: max = 278 nm(Elin =67,1)- 0,In nátrium-hidroxid oldatban: max =297nm(Eí|jn =124,1)- foszfát-pufferben (pH 7,4): max =277nm(Elfm %75,0), d. ) infravörös abszorpciós spektruma nujolban a következő jelentősebb abszorpciós maximumokat mutatja (cm“1): 3700—2000, 2970-2850 (nujol), 1655, 1610, 1595, 1515, 1490, 1460 (nujol), 1375 (nujol), 1300, 1230, 1145, 1060, 1010,890,850, 820, 720 (nujol), e. ) elemanalizise, miután a mintát előzetesen inert atmoszférában 140°C hőmérsékleten szárítottuk (tömegveszteség = 8,4%), a következő hozzávetőleges százalékos összetételt mutatja (átlag): szén 56,74%, hidrogén 4,27%, nitrogén 7,99%, klór 5,11%, hamu 0,6%, f. ) Rf értékei az alábbi vékonyréteg-kromatográfiás (TLC) rendszerben a következők: Eluáló rendszer (térf./térf.) Rf érték I. acetonitril/víz 75:25 0,53 (Silicagel Merck 60 F2s4) II. acetonitril/5%-os vizes nátrium-szulfát 30:70 0,53 (Silicagel Merck silanized 60 F254), a megjelenítést 254 nm-es UV fénnyel, vagy 3%-os etanolos ninhidrinnel vagy 1%-os metanolos fluoieszcaminnal végezve, , g. ) retencies ideje (ír) 10,8 perc,'amikor fordított fázisú HPLC-vel elemezzük, 150 x 4,0 mm-es Zorbax® ODS (5-6 m) oszlopot használva (Zorbax a Dupont Co. cég védjegyezett neve egy oktadedl-szilán szilikagél-mátrixra) és B oldat A oldatban 40 perc alatt 0%-ről 50^ra növekedő lineáris gradiensével eluálva 2 ml/perc áramlási sebességgel, ahol az A oldat összetétele: 25 mmól/literes NaHjPO,) oldat/acetonitril 9:1, pH 6,0 értékre pufferolva 0,ln NaOH-val és a B oldat összetétele: 25 mmól/literes NaH2P04 oldat/ acetonitril 3:7, pH 6,0 értékre pufferolva 0,1 n NaOC- val, belső standardként 3,5-dihidroxi-toluolt alkalmazva, ahol tj> értéke 5,60 perc, h. ) a 270 MHz-nél, DMSO-d6-ban 60°C hőmérsékleten, 20 mg/ml min ta-koncentrációval felvett lHNMR 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 10
