194268. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az O-mikaminozil-tilonolid észter-származékai előállítására
1 194 268 2 vőanyaga valamely csppfolyós halmazállapotú közeg, amelyhez szükség esetén bizonyos kis érőanyagokat is adhatunk. A szuszpenzió közege lehet például vizes polivinü-pirrolidon, semleges olajok, mint például növényi olajok vagy nagymértékben finomított ásványi olajok, vagy pedig vizes karboximetil-cellulóz. A szuszpenzió-formájú készítményekben alkalmas, élettanilag elfogadható kísérőanyagokat kell használnunk alihoz, hogy a hatóanyagot szuszpenzió formájában tartsuk. Az ilyen kísérőanyagok lehetnek például sűrítőszerek, mint például a karboximetil-cellulóz, polivinü-pirrolidön, zselatin és az alginátok. Számos felületaktív anyagot is használhatunk szuszpendálószerként. Alkalmas szuszpendálószerek például alecitin, alkil-fenol-polietilén-oxid adduktok, naftalin-szulfonátok, alkil benzol-szulfonátok és a polioxietilén-szorbitán-észterek. Egyes esetekben az injekciós szuszpenziók elkészítéséhez használhatunk olyan szereket, amelyek a cseppfolyós szuszpendáló közeg hidrofilitását, sűrűségét és felületi feszültségét befolyásolják. Így például használhatunk szilikon -típusú habzásgátl ókat, szorbitot és cukrokat. A találmány szerinti eljárást és a kiindulási anyagok előállítását a továbbiakban — a találmány oltalmi körének szűkítése nélkül — példákkal szemléltetjük. 1. példa 0-Mik amin ozil-tilon olid előállítása de mi cin ozil -tilozin ból a) lépés Demicinozil-tilozin előállítása rázottlombik-tenyészetben Streptomyoes fradiae NRRL 12170 fagyasztva szárított tenyészetét 1-2 ml sterilizált vízben diszpergáljuk, és az így kapott oldat 0,5 ml térfogatú részletével beoltunk 150 ml, alábbi összetételű vegetatív táptalajt. összetevő kukoricalekvár élesztőid vonat szójadara kalcium-karbonát nyers szójaolaj ion mentesített víz Mennyiség (%) 1,0 0,5 0,5 0,3 0,45 97,25 Eljárhatunk úgy is, hogy az S. fradiae NRRL 12170 vegetatív tenyészetét 1 ml térfogatú részletekben cseppfolyós nitrogénbe hűtve tároljuk, majd a felhasználás előtt egy-egy ilyen részletet gyorsan szobahőmérsékletre melegítünk, és ezzel oltjuk be a vegetatív táptalajt. A beoltott vegetatív táptalajt 500 mles Erlenmeyer-lombikban, 29 UC hőmérsékleten, körülbelül 48 órán át percenként 300-as fordulatszámmal zárt rendszerű rázószekrényben rázatjuk. Az így kapott vegetatív táptalaj 0,5 ml térfogatú részletével beoltunk 7 ml, alábbi összetételű termelő táptalajt : 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Összetevő Mennyiség (%) cukorrépa-melasz 2,0 kukoricaliszt 1 ,5 halliszt 0,9 kukorica-glutin 0,9 nátrium-klorid 0,1 diammónium-hidrogén-foszfát. 0,4 kaldum-karbonát 0,2 nyers szójaolaj 3,0 i on men tes íte tt víz 91,3 6 A beoltott táptalajt egy 50 ml térfogatú palackban 6 napig 29 °C hőmérsékleten,percenkénti 300-as fordulatszámmal zártrendszerű rázóasztalon rázatjuk. b) lépés A de mi cin ozil-tilozin előállítása tankfermentorban Nagyobb térfogatú inokulum (átoltó tenyészet) előállítása céljából 1200 ml, az a) lépésben leírthoz hasonló módon előállított, inkubált vegetatív táptalajjal beoltunk 1135 1, az alábbi összetételű második vegetatív táptalajt : Összetevő kukorica lekvár szójaliszt (nem olajmentesített élesztőkivonat kaldum-karbonát nyers szójaolaj nyers ledtin víz Mennyiség (%) 1,0 0,5 0,5 0,3 0,5 0,015 97,185 A táptalaj pH-ját 50%-os nátrium-hidroxid-oldattal 8,5-re állítjuk. Ezt a második táptalajt egy 1589 1 térfogatú tankfermentorban, megfelelő levegőztetés és keverés mel lett körülbelül 48 órán át 28 °C hőmérsékleten tart juk (inkubáljuk). Az így előállított, inkubált második táptalaj 654 1 térfogatú részletével oltunk be 4540 1 steril alábbi összetételű termelő táptalajt: összetevő Mennyiség (%) halliszt 0,875 kukoricaliszt 1,5 kukorica-glutin 0,875 kaldum-karbonát 0,2 nátrium-klorid 0,1 diammónium-hidrogén-foszfát 0,04 cukorrépa melasz 2,0 nyers szójaolaj 3,0 ledtin 0,09 víz 91,32 A táptalaj pH-ját 50%-os nátrium-hidroxld-oldattal 7,2-re állítjuk. A beoltott táptalajban lévő mikroorganizmust egy 7264 1 térfogatú tankfermentorban 8-9 napon át 28 "C hőmérsékleten tenyésztjük. A táptalajt steril levegővel levegőztetjük, és így az oldott oxigdi szintjét körülbelül 30% és körülbelül 50% között tartjuk, a táptalajt percenkénti 250-es fordulatszámmal, a szokásos keverővei keverjük. 6
