194049. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gyulladásgátló készítmények előállítására
dihidroldoridsó alakjában. 4. példa A példában ismertetett eljárással azt vizsgáljuk, hogyan befolyásolja a 2-guanidino-4-(2-metil-4-imi(lazolil)-tiazol a piroxikámnak az adjuváns indukálta izületi gyulladással szembeni hatékonyságát patkány esetében. Az adjuváns indukálta izületi gyulladást 250- —270 g súlyú kifejlett him Wistar-Lewis patkányokon (Charles River Breeding Laboratories, Kingston, N.Y.) váltjuk ki 0,1 ml ásványi olajban elszuszpendált 1 mg Mycobacterium butiricum (Difco Laboratories, Lot # 0640—33) egyszeri, talp alá adott injektálásával, Waltz és munkatársai által leírt módszer szerint [Proc.Soc. Exptl. Bioi. med., 136, 907-910(1971)]. A beadandó gyógyszereket vízben oldjuk, és annyi híg nátrium-hidroxid oldatot adunk hozzá, hogy oldódásukat biztosítsuk. A kontroll állatok csak vizet kapnak. Miután az oldat kémhatását pH=7,0 értékre állítottuk be, testsúly-kilogrammonként 10 ml-t adunk be az állatokba egy tompa végű, 18-as méretű tűvel. A gyógyszerdózisokat az adjuváns beinjektálását megelőző naptól kezdve adjuk be naponként, és az izületi gyulladás indukálásától számított 16. napig folytatjuk. Az adjuváns befecskendezésével egyidőben megmérjük a hátsó mancs térfogatát (Vi) és az adjuváns befecskendezését követő negyedik napon megmérjük az injektált mancs megduzzadásának nagyságát (Vf-Vi). Ezt tekintjük az elsődleges válasznak vagy károsodásnak. Az adjuváns befecskendezését követő 16. napon a nem-injektált, ellenkező oldali mancs megduzzadásának mértékét (Vf-Vi) tekintjük másodlagos válasznak vagy károsodásnak. Meghatározzuk az állatok súlyát a kísérlet kezdetekor, valamint az adjuváns befecskendezését követő 4. és 16. napon. Az ödéma kialakulásának százalékos gátlását az alábbi képlettel számoljuk ki: Vf -Vi százalékos gátlás (%) = 1 - 777- _v:............. *100 v Kontroll ’ kontroll-J A kapott eredményeket a IV. és az V. táblázaton mutatjuk be. Amint az a IV. táblázat lineáris regressziós analízissel kiszámolt adataiból látható, az egymagában alkalmazott piroxikám korrelációs együtthatója (r) és EDso értéke az elsődleges károsodást illetően r=l,00, illetve EDso = 0,45 mg/kg. A 2-guanidino-4-(2-metil-4-imidazolil)-tiazolnak nincs szignifikáns hatása az elsődleges károsodással kapcsolatban, és bár szignifikáns hatása van a másodlagos károsodás kialakulására, ezekből az adatokból nem lehetett megbízható EDso értéket nyerni. Az V. táblázat adatai jelzik, hogy ha növeljük a 2-guanidiono-4-(2-metil-4-imidazolil)-tiazol dózisát, a piroxikám egyre hatékonyabb lesz a másodlagos károsodásnál jelentkező duzzanat mértékének csökkentésében. így az EDso érték, amit a piroxikám egymagában való alkalmazásakor kapunk, 0,45 mg/kg-ról 0,10 mg/kg értékre csökken, ha a piroxikámot 10 mg/kg 2-guanidino-4-(2-metil-4-imidazolil)-tiazollal együtt alkalmazzuk. Ez az eltolódás a piroxikám hatékonyságának ötszörös növekedését jelenti. Hasonló, de jelenleg még kevésbé megbízható megfigyeléseket tehetünk az elsődleges károsodással kapcsolatban is. IV. táblázat A piroxikám és a 2(-guanidino-4-(2-metil-4-imidazolil)-tiazol (A" végyület) hatása az adjuváns indukálta izületi gyulladásra oxikám orális dózis mg/kg tt . it ... A+++ A vegyület százalékos gátlás X±SE* elsődleges másodlagos károsodás károsodás 0,10 _ 29 (4r 26 (2)~ 0,33 — 33 (8)~ 43 (4)~ 1,00 — 45 ar 64 or — 1,0 0(6) 3 (3) — 3,3 0(3) 28 (4)~-10,0 2(2) 27 (3) * az ödéma gátlásának átlagértéke, ± sztandard hiba, 21 állatot használtunk az egyes piroxikám dózisoknál (14 állatnál szabad enolt, 7 állatnál etanolaminsóját), az "A” vegyület két alacsonyabb dózisánál 7 patkányt, a 10 mg/kg-os dózisnál 14 patkányt használtunk. ** Szignifikánsan különbözik (p-^0,05) a nem kezelt artritiszes patkányoktól a nem párosított adatok Student-féle t-próbájával meghatározva. w dihidroldoridsó formájában alkalmazva. V. táblázat A 2-guanidino-4-(2-metil-4-imidazolil)-tiazol ("A" vegyület) hatása a piroxikám etanol-aminsójának az adjuváns indukálta izületi gyulladással szembeni hatékonyságára piroxikám orális dózis másodlagos károsodás "A" vegyület X\%) r~ EDso~ r'~ mg/kg 0,10 26 0,33 — 43 1,00 0,45 1,00 — 64 0,10 1,0 27 0,33 1,0 61 1,00 0,24 1,00 1,0 87 0,10 3,3 39 0,33 3,3 64 1,00 0,17 1,00 3,3 91 0,10 10,0 51 033 10,0 72 1,00 0,10 1,00 10,0 93 ^ 1. a IV. táblázatban megfelelő lábjegyzetet, lineáris regressziós analízissel kiszámolt korrelációs együttható (r/) és EDs o érték, ara piroxikám 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
