193879. lajstromszámú szabadalom • Eljárás morfolinil-daunorubicin- és morfolinil-doxorubicin-származékok és a hatónyagként ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyászerkészítmények előállítáásra
193879-dezamino-3'- (3"-ciano-4"-morfolinil)- 13-dihidro-daunorubicint kapunk. 360 MHz NMR CDC13: hasonló a 3'-dezamino-3'-(3"-ciano-4"-morfolinil) -daunorubi’cinéhez, kivéve, hogy a 14-H3 rezonanciák 2,43, 2,46 6 2s) felfelé el vannak tolódva (1,32, 1,30, 2d, J=64 Hz). Tömegspektrum (mint a trimetilszilil-származékok (TMS), m/e 957 [M/TMS/5-HCN] 885 [M/TMS/4- -HCN] TLC SiGel CHC13. (19:1) R,=0,28. 2. példa 3'-Dezamino-3'-(3"-ciano-4"-morfolinil) --doxorubicin és 3'-dezamino-3'-(3"-ciano--4"-morfolinil)-l3-dihidro-doxorubicin előállítása és izolálása 6,25 g (60,0 mmól) 1,4-anhidro - eritrit 75 ml vízzel kevert vízfürdőn hűtött oldatához 15-20°C-on 6,42 g (30,0 mmól) nátrium-metaperjodátot adunk. A kapott tiszta oldatot szobahőmérsékleten 17 óra hoszszat keverjük. Az oldat pH-értékét nátrium-hidrogénkarbonáttal 4,0-ról 7,3-ra állítjuk, majd keverés közben 75 ml metil-cianiddal hígítjuk. Csapadék keletkezik. Az elegyet, amely 2,2' oxi-diacetaldehidet tartalmaz, keverjük és hozzáadunk 0,126 g (2 mmól) nátrium-cianobórhidrid 5 ml metil-cianid és víz 1:1 arányú elegyében. Az etegyhez 1,16 g (2,0 mmól) doxorubicin-hidrokloridot adunk 30 ml metil-cianid és víz 1:1 arányú elegyében. 10 perc múlva a reakcióelegyet 50 ml híg nátrium-hidrogén-karbonáttal hígítjuk és háromszor extraháljuk 50 ml-es kloroform adagokkal. A nyers extraktum 3'-dezamino-3'- (4"-morfolinil) -doxorubicint, 3'-dezamino -3'-(4"-morfolinil) -13-dihidro-doxorubicint, 3'-dezamino-3' - (3"-ciano-4"-morfoliniI) - doxorubicint és 3'-dezamino-3'- (3"-ciano-4'-mor folinil) - 13-dihidro-doxorubicint tartalmaz. Az egyesített extraktumokat 5 x 25 ml 0,1 n ecetsavval majd vízzel extraháljuk, híg nát - rium-hidrokarbonáttal és telített vizes nátrium -kloriddal mossuk. A savas vizes fázist elkülönítjük. A kloroformos fázist nátrium-szulleszűrjük és bepároljuk. A kapott maradékot feloldjuk 25 ml kloroformban és az oldószert vákuumban szobahőmérsékleten ismét bepároljuk. 0,518 g (40%) sötétvörös üveghabot kapunk. Ebből az üveghabból 0,424 g-ot feloldunk 1,5 ml diklórmetánban és 1,5 x 35,5 ernes diklórmetánnal mosott 0,074-0,037 mm Bio-Sil A szilikagéJ oszlopra visszük. Az oszlopot 50 ml diklórmetánnal majd diklórmetán és metanol 150 ml 99:1, 150 ml 98:2, 300 ml 97:3, 100 ml 95:5 és 300 ml 90:10 arányú elegyével eluáljuk. 445 ml kezdeti eluátum gyűjtése után 80 ml-es frakciót bepárolunk, és így 0,217 g terméket kapunk. Az anyagot egyesítjük 0,039 g korábban előállított tisztított termékkel és az elegyet feloldjuk 2 ml diklórmetánban, 10 ml metanollal hígítjuk és szárazra pároljuk. A maradékot 5 ml metanollal eldörzsölve 0,218 g 7 3'-dezamino-3'- (3"-ciano-4"-morfolinil) -doxorubicint kapunk. A nagynyomású folyadékkromatográfiás és a 400 MHz NMR analízis szerint a termék diasztereoizomer. Waters Radial-Pak C-18 oszlopon 0,05 M pH=4 citrát puffer-metil-cianid (65:35) arányú elegyével 2 ml/ /perc sebességgel végzett nagynyomású folydékkromatográfiásan végzett analízis 2 közeli csúcsot mutat 14,4 percnél és 15,7 percnél 58:39 aránynál. A 400 MHz spektrum két rezonanciát mutat az 1-H, 2-H, 3-H, l'-H, 7-H, 14-H2, 9-OH, OCH3, 10A-H és 6'-H3 protonokra. 400 MHz NMR CDC13 ő 14,02 (s, 6-OH), 13,26 (s, 11-OH), 8,05, 8,04 (2d, 1-H), 7,80, 7,79 (2t, 2-H), 7,41, 7,40 (2d, 3-H), 5,61, 5,57 (2d, l'-H), 5,34, 5,30 (2m, 7-H), 4,79, 4,78 (2s, 14-H2), 4,54, 4,42 (2s, 9-OH), 4,11, 4,10 (2s, OCH3), 4,05 (m, 5'-H). 3,97 (m, 2"B-H, 3"-H, 6"&-H), 3,71 (m, 4'-H, 6"-A-H), 3,58 (t, 2"A-H), 3,30 (d, J=I9 Hz, 10B-H), 3,07, 3,06 (2d, 10A-H), 3,03 (m, 3'-H), 2,69 (m, 5"-H2), 2,38 (m, 8B-H), 2,22 (m, 8A-H), 1,84 (m, 2'-H2), 1,61 (s, H20), 1,40, 1,39 (2d, J=6,5 Hz, 6'-H3). UV-Vis (CH3OH) max 234 nm) 40,100), 252 (27,700), 289 (9,420), 478 (13,000), 495 (13,000), 495 (12,900), 530 (7,190). Tömegspektrum (trimeti 1 sziIi 1 ) (TMS) származékokként), m/e 899 (TMS)4-HCN. Analízis a C32H34N2012-2H20 képlet alapján: számított: C % 56,97 H % 5,68 N % 4,15 talált: C % 57,07 H % 5,37 N % 4,17. A fenti oszlop további eluálásával 0,041 g 3'-dezamino-3'- (3"-ciano-4"-morfolinil) -13- -dihidro-doxorubicint kapunk. UV-Vis (CH3OH) max 234 nm (e 37,400), 252 (28,000), 289 (9,390), 475 (12,700), 496 (12,800), 530 (7,410). iomegspektrum (trimetilszilil (TMS) származékokként), m/e 985 M (TMS)5-CH3, 973 M (TMS)s-HCN Analízis a C32H36N20|2-1,5 H20 képlet alapján számított: C % 57,57 H % 5,89 N % 4,20 talált C % 57,35 H % 5,94 N % 3,82. A találmány szerint előállított vegyieteket emlősök tumorellenes szereként hasznosíthatjuk. Ezt a hatást in vívó és in vitro vizsgálatokkal bizonyítottuk. Az egyik in vivo tesztben, melyet a Cancer Chemotherapy Reports, National Cancer Institute, 3, 2. sz., 3. rész, 1972. szeptemberében írtak le, egészséges egereket intraperitoneálisan Lymphocita leukémia P-388 aszcétes folyadékkal oltottuk be. A beoltott egereket ezután az 5., 9. és 13. napon kezeltük különböző mennyiségű találmány szerinti vegyülettel. összehasonlításképpen más egereket nem kezeltünk és további egereket kezeltünk daunorubicinnel, doxorubicinnel vagy a 4.301.277 sz. Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírásban leírt 3'-dezamino-3'-(4"-morfolinil)-daunorubicinnel vagy 3'-dezamíno-3'- (4"-morfolinil)-13-dihidrodaunorubicinnel vagy a 4.314.054 sz. Amerikai Egyesült Államok-beli 8 5 & 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
