193879. lajstromszámú szabadalom • Eljárás morfolinil-daunorubicin- és morfolinil-doxorubicin-származékok és a hatónyagként ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyászerkészítmények előállítáásra
193879 NAI03 válik ki. Az elegyet állni hagyjuk, majd a pH-t néhány csepp nátrium-hidrogénkarbonát oldat hozzáadásával 7,3-ra állítjuk be és 500 ml víz hozzáadásával az oldódás befejeződik. Az így keletkezett 2,2'-oxi-diacetaldehidet nem izoláljuk. A dialdehid oldathoz 9,2 g (16,3 mmól) daunorubicin • HC1 50 ml CH3CN és víz 1:1 arányú elegyével képezett oldatát adjuk és szobahőmérsékleten keverjük az elegyet. Az elegy zavaros lesz és 45 perc múlva kevés szilárd anyag válik ki, további 75 ml metilcianid hozzáadásával csak részben lehet oldatba vinni az anyagot 2,02 g (32,6 mmól) nátriumciano-bórhidrid 6 ml vízzel készített oldatát adjuk az elegyhez, majd 1 óra hosszat keverjük, vízzel hígítjuk és 5x200 ml kloroformmal extraháljuk. Az egyik fázisban sem oldódott 0,91 g szilárd anyagot szűréssel távolítjuk el. A kloroform lepárlása után a nyers reakciótermék 3'-dezamino-3'- (4"-morfolinil) -dau_ norubicint, 3'-dezamino-3'- (4"-morfolinil) -13- -dihidro-daunorubicint, 3'-dezamino-3'- (3"-ciano-4"-morfolinil)-daunorubicint és 3'-dezamino-3'- (3"-ciano-4"-morfolinil)-13-dihidrodaunorubicint tartalmaz. 5,41 g szilárd nyers terméket feloldunk 500 ml kloroform és metanol 9:1 arányú elegyében. Az oldatot 3x100 ml 0,01 n sósavval, 1x100 ml víz zel és 1x100 ml híg nátrium-hidrogén-karbonáttal mossuk. A szerves fázist szárítjuk, szárazra pároljuk és a maradékot 0,1 Hgmm nyomáson vákuumban szárítjuk szobahőmérsékleten. 5,10 g üveges maradékot kapunk. Az 5,09 g maradékot feloldjuk 50 ml diklórmetán és metanol 4:1 arányú elegyében. Az oldatot keverjük, míg 30 ml metil-cianidot csepegtetünk hozzá. A zavaros oldatot szárazra pároljuk,és így félig szilárd maradékot kapunk, melyet 200 ml metilcianiddal a sötétben eldörzsölünk. Az oldhatatlan szilárd anyagot elkülönítjük és másodszor is eldörzsöljük 100 ml metil-cianiddal. A két eldörzsölés után kapott folyékony fázis a kívánt anyagot tartalmazza. Bepárlás után 2,23 g félig szilárd maradékként 3'-dezamino-3'- (3"-ciano-4"-morfolinil)-daunorubicin és 3'-dezamino-3'- (3"-ciano-4"-morfolinil) - -13-dihidro-daunorubicin nyers keverékét kapjuk. A félig szilárd maradékot ezután feloldjuk 5 ml diklórmetánban és diklórmetánnal mosott 3,1 cm x 59 cm-es 0,074 mm—0,044 mm Mallinckrodt Silic AR CC-7 szilika gél lel töltött oszlopra visszük. Az oszlopot 500 ml diklórmetánnal, majd diklórmetán és metanol 1500 ml 99:1, 1000 ml 98:2, 1500 ml 97:3 és 500 ml 90:10 arányú elegyével eluáljuk. 10 ml-es frakciókat gyűjtünk, (vékonyréteg-kromatográfiásan figyeljük) a 2550 ml kezdeti eluátumból, 190 ml frakciót bepárlunk és 0,48 g terméket kapunk. A főkomponenst összehasonlító nagynyomású folyadékkromatográfiásán és vékonyréteg-kromatográfiá-4 5 san határozzuk meg7 és eszerint a termék nem tiszta 3'-dezamino-3'-(3"-ciano-4"-morfolinil) -daunorubicin. 0,35 g fenti mintát tovább tisztítunk először sötétben öt 2 mm x 20x20 cm-es szilikagél lemezeken, futtatószerként kétszer használjuk diklórmetán és metanol 29:1 arányú elegyét. A bemért minta tömegének 65%-át tartalmazó középső sávot kivágjuk és eluáljuk szűrjük és szárazra pároljuk, majd az ugyanígy tisztított anyagokat kinyerjük a kromatográfiás oldalról szomszédos zónákból és 0,18 g-ot még egy végső tisztításnak vetünk alá egy 1,1 cm x 27 cm-es 0,074-0,037 mm szilikagél oszlopon. Az oszlopot diklórmetán és etílacetát 30 ml 80:20, 30 ml 60:40 és 30 ml 80:20 arányú elegyével végül 175 ml etilacetáttal eluáljuk. A kezdeti eluátum 16 ml-ét 2 ml-es frakciókban gyűjtjük és vékonyréteg-kromatográfiásan követjük nyomon, majd 88 ml frakciót gyűjtünk és ezt bepároljuk. 0,15 g terméket kapunk. Elemanalízis szerint a kapott tiszta termék 3'-dezamino-3'- (3"-ciano-4"-morfolinil)-daunorubiein. Ugyanezt a szerkezetet igazolja a 360 MHz, NMR, IR és a tömegspektroszkópia. A termék diasztereomer formájában való keletkezést mutatja a nagynyomású folyadékkromatográfiás analízis és a 360 MHz NMR analízis. A nagynyomású folyalékkromatográfiás analízis Waters Radial Pak C-18 oszlopon 0,5 M pH 4 citrát-puffer-metilcianid 60:40-el 2 ml/perc mellett két közeli csúcsot mutat 9,6 percnél és 10,2 percnél 53:44 arányban. A 360 MHz NMR spektrum ennél az anyagnál két rezonanciát mutat a 6-OH, 11-OH, 1-H, 2-H, 3-H, l'-H, 7-H, 9-OH, 10A-H, 14-H3 és 6-H3 protonokra. 360 MHz NMR CDC13 Ô 13,99, 13,98 (2s, 6-OH), 13,25, 13,24 (2s, 11-OH), 8,02, 8,00 (2d, 1-H), 7,79, 7,77 (2t, 2-H), 7,40, 7,38 (2d, 3-H), 5,59, 5,56 (2d, l'-H), 5,29, 5,26 (2bs, 7-H), 4,47*, 4,34* (2s, 9-OH), 4,08 (s, OCH3), 3,97-4,07 (m, 2" B-H), 3,92 (t, J = l2Hz 3"-H), 3,74 (m, 2"A-H), 6"B-H), 3,68 (bs, 4'H), 3,58 (t, J = 12Hz, 6"A-H), 3,20 (d, J=19Hz, 10B-H), 2,91, 2,90 (2d, J = 19Hz, 10A-H) 2,75-2,95 (m, 3'-H), 2,68 (m, 5"-H2), 2,43, 2,42 (2s, 14-H3), 2,35 (m, 8B-). A 3'-dezamino-3'- (3"-ciano-4"-morfolinil)-daunorubicin eluálása után a Mallinckrodt Silic ARCC-7 szilikagél oszlopot di - klórmetán és metanol 90:10 térfogatarányú elegyével tovább eluáljuk. 3460 ml eluálószer összegyűjtése után 12,5% eredetileg betáplált anyagot tartalmazó 430 ml frakciót gyűjtünk, amely lényegében egy anyagból áll, és bepároljuk. A vegyület nem tiszta 3'-dezamino-3'- (3"-ciano-4"morfolinil) -13- -dihidro-daunorubicin, amelyet tovább tisztítunk ugyanolyan módszerrel, mint a nemhidrogénezett analógot és lényegében tiszta 3'-6 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
