193865. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 8-klór-1,5-benzotiazepin-származékok előállítására
15 193865 5. Kísérlet (Vérlemez-aggregációt inhibiáló hatás) Hím, Sprague-Dawley, éterrel érzéstelenített patkányok hasi aortájából vért vettünk. Kilenc térfogatrész patkányvért egy térfogat- 5 rész vizes trinátrium-citrát-oldattal elegyítettünk, és az elegyet centrifugáltuk. így vérlemezben gazdag plazmát (PRP“) kaptunk az oldat felülúszójaként. Az alsó réteget továbbcentrifugáltuk, és felülúszóként egy 10 vérlemezben szegény plazmát („PPP“) kaptunk. A PRP plazma vérlemez koncentrációját a PPP plazma segítségével 0,8X106/mm3 értékre állítottuk be. Ezután 200 pl hígított PRP és 25 pl vizsgált vegyület elegyét, 15 amelynek végkoncentrációja 100 mikrogramm/ml volt, 2 percen át 37°C-on kevertünk, majd 25 pl kollagén oldatot (Biochim.. Biophys. Acta, 186, 254 (1969)) fadtunk hozzá. A vérlemez-aggregációt Born módszerével (Nature, 194, 927 (1962)) határoztuk meg, és ebből a vérlemez-aggregáció-inhibiálás %-át számítottuk. A vizsgált vegyület vérlemez-aggregációt inhibiáló hatása „—", amennyiben a vegyület kisebb, mint 10% vérlemez-aggregáció-inhibiálást mutat, „+“, amennyiben a vizsgált vegyület 10%-nál nem kisebb vérlemez-aggregációt inhibiáló hatást mutat, de hatása kisebb, mint az acetil-szalicilsav (Í00 mikrogramm/ml) által kifejtett hatás; vagy „ + + amennyiben a vizsgált vegyület vérlemez-aggregációt inhibiáló hatása legalább olyan erős, mint az acetil-szalicilsavé (100 mikrogramm/ml). A kísérlet eredményeit az V. táblázatban foglaltuk össze. 16 V, Táblázat Vizsgált vegyület Vérlemez-aggregációt inhibiáló hatás (A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek) (±)-cisz-2-(4-metoxi-fenil)-3-acetoxi-5-£2-(dimetil-amino)-etil] -8- -klór-2,3-dihidro-1,5-benzotiazepin-4(5H)-on-hidroklorid ++ (+)-cisz-2-(4-metoxi-fenil)-3-hidroxi-5-|2-(dimetil-amino)-etil] -8- -klór-2,3-dihidro-1,5-benzotiazepin-4(5H)-on-oxalát ++ > (±)-cisz-2-(4-metoxi-fenil)-3-acetoxi-5-£2-(N-metil-N-propil-amino)-etil]-8-klór-2,3-dihidro-1,5-berzotiazepin-4(5H)-on-oxalát + + (+)-cisz-2-(4-metoxi-£enil)-3-acetoxi-5-£2-(dietil-amino)-etil] -8- -klór-2,3-dihidro-1,5-benzotiazepin-4(5H)-on-oxalát + + (+)-cisz-2-(4-metoxi-fenil)-3-propionil-oxi-5-[2-(dimetil-amino)-etil]-8-klór-2,3-dihidro-1,5-benzotiazepin-4(5H)-on-oxalát ++ 1. példa 6,8 g ( + )-cisz-2-(4-metoxi-fenil)-3-hidroxi-8-klór-2,3-dihidro-l,5-benzotiazepin-4(5H)-on, 3,02 g 2-(dimetil-amino)-etil-klo- gO rid-hidroklorid, 6,1 g kálium-karbonát és 150 ml aceton elegyét 20 órán át visszafolyatás mellett forraljuk. Miután a reakció lejátszódott, az oldhatatlan anyagot leszűrjük és etanollal mossuk. A mosófolyadékot egyesítjük a szűrlettel, és az egyesített oldatot vákuumban bepároljuk. A maradékot etil-acetátban oldjuk, és az oldatot vízzel mossuk, megszárítjuk, majd bepároljuk. A maradékot etil-acetát-hexán-oldószer-elegyből átkristályosítjuk, 7,13 g ( + )-cisz-2-(4-metoxi-fenil)-3-hidroxi-5- [2-(dimetil-amino)-etil] -8- -klór-2,3-dihidro- l,5-benzotiazepin-4 (5H) -ont kapunk, tűs kristályos anyagként. Op.: 122—124°C (bomlik)". [ct]|,0 = +144,6° (c=0,85, metanol). 9
