193812. lajstromszámú szabadalom • Eljárás korrinoidok elválasztására
193812 6 az oldatokat lefele vagy felfele áramoltathatjuk. A pH beállítását valamilyen alkalmas lúggal, előnyösen ammönium-hidroxiddal vagy nátrium-hídroxiddal végezzük. A találmány szerinti eljárással az elválasztás elvégezhető nyers fermentlevek esetében, de elvégezhető már tisztított oldatok esetében is. A fentiek alapján a találmány szerinti eljárás előnyeit a következőkben foglalhatjuk össze: 1) Az elválasztás szelektív, nem jár kobalamin veszteséggel. 2) Az eljárás egyaránt alkalmas nyers fermentlevek esetében a sejtek feltárásával oldatba vitt korrinoidok, valamint a már egy vagy több lépésben tisztított, korrinoidokat tartalmazó oldatok kezelésére. 3) A módszer ipari méretben egyszerűen megvalósítható technológiát tesz lehetővé, mert az alkalmazott nagy fajlagos felületű polimer adszorbensek adszorpciós kapacitása igen nagy, fizikai és kémiai stabilitása jó, az adszorbens az elválasztás után az adszorpciós berendezésben is könnyen regenerálható. 4) A fenti előnyöket még fokozza az, hogyaz eljárás alkalmazható csak szulfit ionok, illetve ezeket leadni képes vegyületek esetében is, így ipari alkalmazás esetében kiiktathatók a cianid ionok alkalmazásakor mindig nagy költséget és figyelmet igénylő biztonságtechnikai és környezetvédelmi beruházások. 5) Acetont alkalmazva a B12-vitamin ismert módon való eluálására, eljárásunk szerint a kivonatban lévő B12-vitamin további aceton hozzáadásával már kristályosítható. Az ismert eljárásokban leírt oldószerek alkalmazása esetén viszont csak egy további bepárlási lépés közbeiktatása után kristályosítható a B,2-vitamin. 6) Az elkülönített 111. faktor esetleges sómentesítés, bepárlás és szárítás után takarmányadalék koncentrátumként jól hasznosítható. A találmány szerinti eljárást az alábbi példák szemléltetik anélkül, hogy igényünket ezekre a példákra korlátoznánk. A) Kiindulási anyagok előállítása A) a) A 159 356 lajstromszámú magyar szabadalmi leírás szerint félfolyamatos eljárással készített, az Országos Közegészségügyi Intézetben 76, 77, 78, 79 szám alatt deponált Corynebacterium sp.-t (jelzése 244 Cl), Lactobacillus sp.-t (jelzése 244 B Cl) és Propionbacterium sp.-t (jelzése 239 AI/6) tartalmazó, metántermelő, vegyes populációjú fermentlé feltárását, azaz a sejteken belül elhelyezkedő korrinoidok oldatbevitelét a 171 339 lajstromszámú magyar szabadalmi leírás szerint végezzük a következő módon: 1 m3 fermentléhez, amely 24,2 g kobalamint és 95,6 g inkomplett korrinoidot tartalmaz, 1 liter 10%-os nátriumcianid oldatot adunk és 20%-os nátriumhidroxid oldattal pH=9 5 4 értékre lúgosítjuk, majd az elegyet keverés közben 70°C hőmérsékletre melegítjük és ezen a hőmérsékleten tartjuk 30 percig. Ezután 50 liter 30%-os vas(IIl) - klorid oldatot (17,4 kg FeCl3 6H20) adunk az elegyhez, 10 perc keverés után 20%-os nátrium-hidroxid oldattal az elegy pH-ját 8 értékre állítjuk be.További 10 perc keverés után az elegyből a csapadékot ülepítő centrifugával elkülönítjük. Az így nyert oldat 1 m3-e 23 g kobalamint és 88 g inkomplett korrinoidot tartalmaz. A) b) Az A) a) pontban megadott módon nyert fermentlevet a 469/83 számú magyar szabadalmi bejelentés szerint, annak 1. példájában megadott módon tisztítjuk, makroretikuláris adszorbciós gyantával megkötve a fermentlében levő szennyezéseket a korrinoidokat tartalmazó még ép sejtek mellől, majd a sejteket feltárva oldatba visszük a korrinoidokat. Az így nyert csapadékos oldatból történik jelen eljárásunk szerint a korrinoidok szelektív adszorbciója, illetve szelektív elúciója. A fermentlé fenti tisztítását a következőképpen végezzük. Az A) a) pontban megadott módon fermentált 1 m3 fermentlevet, amely literenként 28 mg B,2-vitamint és 5,2 mg Ili. faktort, valamint 129 mg inkomplett korrinoidokat tartalmaz, kéttagú, sorbakapcsolt, mozgóágyas adszorbciós rendszerben tisztítunk: a szüretien fermentlevet folyamatos áramoltatással két, egyenként 25 liter hasznos térfogatú és 10-10 liter Diaion SP207 adszorbciós gyantát tartalmazó készüléken áramoltatjuk át 100 liter/óra átfolyási sebességgel. Ennek során a fermentlében jelenlévő extracelluláris szenynyezőanyagok fő tömege adszorbeálódik a gyantán. A fermentlé átfolyása után a gyantaoszlopokat 100 liter vízzel átmossuk. Az így részlegesen tisztított fermentléhez 2500 ml 10%-os kálium-metabiszulfit oldatot adunk, majd a pH értéket 50%-os vizes kénsav folyamatos adagolásával 4-re állítjuk be. Ezután a fermentlevet átfolyó rendszerben 10 perc tartózkodási idővel 110°C hőmérsékletre melegítjük, amikor is a sejtek feltáródnak és a korrinoidok a fermentlében oldatba mennek. Az így feltárt fermentlevet hőcserélőn átvezetve 30°C hőmérséklet alá hütjük. A fenti módon nyert oldat literenként 27 mg B,2-vitamint, 5 mg III. faktort és 118 mg inkomplett korrinoidot tartalmaz. A) c) Az A) a) pontban megadott módon nyert fermentléből a 188. 425 lajstromszámú magyar szabadalmi leírásban és T/35717 számon közzétett magyar szabadalmi bejelentésben leírtak szerint komplett és inkomplett korrinoidokat együttesen tartalmazó vizes sűrítményt nyerünk a következő módon: Az A) b) példában megadott módon tisztított és feltárt fermentlevet mozgóágyas technológiával alulról felfelé átvezetjük két sorbakapcsolt, egyenként 10 liter Diaion SP 207 gyantát tartalmazó oszlopon. Ekkor a fermentléből a komplett és inkomplett korrinoi-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
