193569. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új tri- és tetrapeptidek és ilyeneket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására

34. példa

H-Tyr-D-Har-Gly-N( Et)-CH2CH2-C6H4-4- -N02.diacetát előállítása

TFA

(A) H-D-Lys-OH előállítása

10 g D-lízin-hidrokloridot 55 ml 1 mólos NaOH-ban oldunk, majd hozzáadunk 11 ml s-etil-trifluor-tio-acetátot,és a kapott keveréket szobahőmérsékleten gyenge nitrogénáramban 7 órán át erőteljesen keverjük, majd szobahőmérsékleten egy éjszakán át állni hagyjuk. Ezután a keveréket jéggel lehűtjük, a terméket szűréssel elválasztjuk, kevés hideg vízzel és etanollal mossuk, majd P205-on szárítjuk. Kitermelés: 4,5 g. Tlc.-vel egyetlen folt (SI, SIII).

Elemanalizis a

C8H13N203F3 összegképletű vegyületre: számított: C% 36,67; H% 5,41; N% 11,57; mért: C% 39,69; H% 5,55; N% 11,43;

TFA jelentése trifluor-metil-csoport.

D-Har jelentése D-homoarginil

TFA '

(B) BOOTyr-D-Lys-OH előállítása

5,11 g BO"C-Tyr-OH-t és 2,09 g N-hidroxi-szukcinimidet 20 ml dioxán, 5 ml etil-acetát és 10 ml DMF elegyében oldunk, majd az oldatot lehűtjük —5°C-ra és hozzáadunk 3,75 g DCCl-t, —5°C-on 1 órán át keverjük, majd 1 óra alatt hagyjuk szobahőmérsékletre melegedni. Ekkor a DCU-ot szűréssel elválasztjuk, kétszer etil-acetáttal mossuk, a szőrieteket egyesítjük, jéggel lehűtjük, majd hozzáadunk 4,4 g H-D-Lys-OH-t, 90 ml víz-TFA

ben oldott 3,06 g nátrium-hídrogén-karbonátot és 15 ml DMF-ot, majd a kapott reakciókeveréket egy éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük, szűrjük és vákuumban az illékony szerves oldószereket eltávolítjuk. A visszamaradó vizes DMF oldatot vízzel hígítjuk, a pH-t szilárd citromsav adagolásával 3,5-re beállítjuk és egyszer 150 ml, majd kétszer 75 ml etil-acetáttal extraháljuk, a szerves extraktumokat 50 ml 5%-os citromsav oldattal, majd kétszer 50 ml vízzel mossuk, vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk. Ily módon 10,6 g olajos terméket nyerünk.

(C) BOC-Tyr-D-Lys-OH előállítása

Az előző lépésben előállított terméket 56 ml metanolban oldjuk, hozzáadunk 56 ml 1 mólos NaOH-t és a reakciókeveréket 20 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd a pH értékét 1 mólos HCl-val 7,0-re állítjuk be. Az így kapott oldatot 250 ml vízzel hígítjuk és I mólos HCl-val 4,0-es pH-ra megsavanyítjuk, a reagálatlan kiindulási anyagokat háromszor 100 ml etil-acetáttal kimossuk, a terméket C18-szilikagéllel töltött 2,5 x 50 ernes oszlopon való kromatograíálással (eluálószer : víz, majd metanol) választjuk el, a metanolos eluátumokat egyesítjük, betömé-17

10

nyitjük, a maradékot vízben oldjuk és fagyasztva szárítjuk.

Kitermelés 5,21 g.

Tlc re tiszta (SIII):

Elemanalízis a

C2oH31N306l,5H20 összegképletű vegyületre: számított: C% 55,04; H% 7,80; N% 9,63; mért: C% 55,02; H% 7,64; N% 9,73;

(D) BOC-Tyr-D-Har-OH.HCl előállítása

3.5 g BOC-Tyr-D-Lys-OH-t 20 ml etanolba i oldunk, hozzáadunk 2,11 g 1-amidino-3,5-dimetil-pirazol-acetátot és 1,7 ml trietil-amínt, majd a keveréket 65 °C-on 7,5 órán át, majd szobahőmérsékleten egy éjszakán át hagyjuk állni. Ezután az oldószert eltávolítjuk, a maradékot 25 ml 4%-os ecetsav oldat és 25 ml etil-acetát között megosztjuk, a vizes fázist elválasztjuk, 20 ml etil-acetáttal mossuk, majd ötször 47 cm-es karboxi-metilcellulózzal töltött oszlopon kromatografáljuk, az eluálószer ammónium-acetát (0,005 mól -► 0,1 mól, pH 5,1). A terméket fagyasztva szárítással nyerjük, mennyisége

3,6 g . Ezt a terméket még tovább tisztítjuk reverz fázisú kromatográfiával (C8-szilikagélen), majd végül hidroklorid sóvá alakítj rk.

Kitermelés 2,86 g.

Elemanalízis a

C21H34N506C1.H20 összegképletre: ízámított: C% 49,85; H% 7,12; N% 13,85; inért: C% 49,69; H% 7,02; N% 14,06;

(E) BOC-Tyr-D-Har-Gly-N( Et)-CH2-CH2- C6H4-4-N02 előállítása

487.5 mg BOC-Tyr-D-Har-OH.HCl-t és 270 mg HOBT-t 10 ml DMF-ban oldunk, az oldatot —5°C-ra hütjük és hozzáadunk 206 g DCCl-t. A keveréket ezután 0°C-on 30 percig állni hagyjuk, majd hozzáadunk

287,5 mg Gly-N(Et) -CH2CH2-C6H4-4-N02-t és 101 mg NMM-t és 5°C-on 72 órán át keverjük. Ezután a DCU-ot eltávolítjuk, az oldatot betöményítjük, és a maradékot 75 ml 5%-os citromsav oldat és 50 ml etil-acetát között megosztjuk, a vizes fázist elválasztjuk, kétszer 50 ml etil-acetáttal mossuk, és a pH-t szilárd kálium-karbonáttal 6,0-os értékre beállítjuk. A terméket háromszor 75 ml etil - -acetát/n-butanol eleggyel (4:1) kiextraháljuk, az extraktumokat egyesítjük, szárazra pároljuk, majd egyszer vízből és háromszor etanolból ismét bepároljuk.

Kitermelés 800 mg habszerü anyag.

Tlc.-vel egy fő komponens (Sí, SIII).

(F) H-Tyr-D-Har-Gly-N(Et)-CH2-CH2-C6H4- -4-N02 előállítása

A 800 mg védett pepiidet 5 ml anizol és 10 ml ecetsav elegyében oldjuk, majd hozzáadunk 10 ml 2 mólos HCl-t. 30 perc elteltével az oldószert vákuumban eltávolítjuk, a maradékot vízben oldjuk és éterrel mossuk. A nyers terméket karboxi-metil-cellulózon ioncserés kromatográfiával tisztítjuk.

18

193569

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65