193548. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nagy hatékonyságú és nagytisztaságú aminoglükozid antibiotikumok előállítására
193548 1 A találmány tárgya eljárás az új gentoximicin A és gentoximicin B, valamint az ismert gentamicin B, B, és sziszomicin nagy tisztaságban való előállítására ezen antibiotikumokat tartalmazó nyers antibiotikum elegyekből. A 168 778 sz. magyar szabadalmi leírásban ismertettük, hogy a Micromonospora purpurea var. nigrescens MNG-122 sugárgomba törzs gentamicin A-t, B-t, B,-t, C,-t, C2-t, Cla-t, X-et és sziszomicint termel. Ezen antibiotikumok elkülönítésére és elválasztására különféle ioncserélős módszereket mutattunk be, amelyekkel a gentamicin C komponenseket egyszerű módon és igen jó hozammal sikerült elkülöníteni, de a gentamicin B komponensek (B és B,) és a sziszomicin elkülönítését csak bonyolult, több egymást követő kromatográfiás lépéssel sikerült megoldani. Vizsgálataink során meglepő módon azt találtuk, hogy a gentamicin B komplex, melyet a 168 778 sz. magyar szabadalmi leírás kiviteli példájának 3. lépése szerint — ismételt kationcserélős kromatográfiát alkalmazva — állítottunk elő, további nagyhatású, eddig ismeretlen, illetve nem azonosított, antibiotikumokat (A, B és C anyagok) is tartalmaz. Ezen anyagok bizonyos mennyisége (1-2%-a) a további tisztítási lépések (6., ill. 7. lépés) során nem távolítható el a gentamicin B komponensektől. A fent ismertetett úton sem a tiszta A, B és C anyagokat, sem teljesen tiszta, 1%-nál kevesebb idegen anyagot tartalmazó gentamicin B-t nem sikerült előállítani. Az idézett szabadalom kiviteli példájának 3. lépése szerint kapott nyers sziszomicin is két további, csak az utóbbi időben felismert hatóanyagot (D és E anyagok) tartalmaz. Ezek az anyagok a korábban ismertetett tisztítási módszerek alkalmazása esetén néhány százalékos mennyiségben szintén szennyezhetik a végterméket. Beható kémiai vizsgálataink során az A és B anyagok a későbbiekben részletesen ismertetett. új, gentamicin típusú antibiotikumoknak bizonyultak. A C anyagot a JI-20B antibiotikummal (3 986 929 sz. amerikai egye-2 sült államokbeli szabadalmi leírás), a D anyagot a 3-N-demetil-gentamicin Cj-vel [J.Antibiot. 30, 945 (1977)1, az E anyagot pedig a gentamicin Á3-mal [J. Org. Chem. 5 40, 2830 (1975)] azonosítottuk. Jelen találmány a fenti két új antibiotikum előállítására és a gentamicin B (és B,), valamint a sziszomicin új módszerrel, igen nagy tisztaságban — 1% alatti mennyiségű 10 idegen anyagot tartalmazó minőségben — történő előállítására vonatkozik. Meglepő módon azt találtuk, hogy a gentamicin B komponenseket és a sziszomicint kísérő, eltérő polaritású szennyező anyagok, 15 melyek elkülönítése a szokásos ammóniás kationcserélő-kromatográfiás módszerekkel nem vagy csak igen jelentős anyagveszteségek árán oldható meg, teljes egészében el távolíthatók, amennyiben ionkizárasos kroma- 20 tográfiát alkalmazunk. Ezt a polaritásbeli különbségen alapuló módszert a gentamicin B komponensek és a sziszomicin elkülönítésére egyetlen eddig ismert eljárás sem alkalmazta. A fentiek szerint eljárva, mód nyílik 25 nemcsak a jelentős gyógyászati hatással rendelkező gentamicin B és sziszomicin igen tiszta állapotban, a humán terápiában biztonsággal alkalmazható formában történő előállítására, hanem két igen előnyös biológiai 30 tulajdonságokkal rendelkező új antibiotikum (A és B anyag) előállítására is. Az A és B anyagok, amelyek korábban a gentamicin B, ill. B, szennyezéseként szerepeltek, azoktól lényegesen eltérő, de szintén 35 igen előnyös antibiotikus hatást mutatnak. Vizsgálataink szerint ezek az anyagok új, eddig le nem írt, természetes eredetű antibiotikumok. Kémiailag a gentamicin B és B, 3’,4’-didezoxi származékai, melyeket gen- 40 toximicin A-nak (A anyag) és gentoximicin B-nek (B anyag) neveztünk el. Kémiai szerkezetüket a csatolt I általános képlet szemlélteti. (Az I általános képletben gentoximicin A esetén R jelentése hidrogénatom, gentoximicin B esetén R jelentése metilcsoport.) Fizikai-kémiai jellemzőiket az 1. táblázatban foglaltuk össze. 1. táblázat Gentomixin A Gentomixin B Összegképlet Cl 9H3 8ÎK08 C2 oHi* 0N4O Molekulasúly /tömegspektrumból/ 450 464 Optikai forgatóképesség M /1%, víz/ + 163° + 158° Elemi analízis: C /számított/ 50,60 51,72 H 8,44 8,62 N " 12,44 12,06 C /talált/ 49,8 50,9 H 8,6 8,4 N " + 12,3 11,8 Rf 0,62 0,68 + Adszorbens: Kieselgel G; eluens: kloroform-metanol-tömény amroónium-hidroxid /1:1 :2/ elegy alsó fázisa. 2
