193538. lajstromszámú szabadalom • Eljárás teichomycin A2 tiszta 1,2,3,4 és 5 faktorok elkülönítésére

193538

i) molekulasúly kb. 1877, FAB tömegspektrometriával meghatározva.

A teichomycin A2 4 faktor fehér amorf por, amely melegítés hatására kb. 210°C-on sötétedni kezd és 250°C-on teljesen elbomlik, amely a következő jellemzőkkel rendelkezik:

a) korlátlanul oldható vízben pH 7,0 felett vagy pH 2-n, dimetilformamidban, dimetilszulfoxidban és propilénglikolban; gyengén oldható metilcelloszolvban és glicerinben; rosszul oldható metanolban és etanolban; csaknem oldhatatlan kloroformban, benzolban, n-hexánban, acetonitrilben, etiléterben, acetonban, etilacetátban, szénietrakloridban;

b) UV abszorpciós spektruma, amelyet a 10. ábrán mutatunk be, a következő abszorpciós maximumokat tartalmazza:

— 0,1N sósavban:

iarnbdamax 278 nm (E{?m = 52,5)

— pH 7,4 foszfát-pufíerben: larnbdamajt 278 nm (E = 52,5)

— 0,1N nátriumhidroxidban: lambda«*,* 297 nm (Eför, = 75,5);

c) IR abszorpciós spektruma, amelyet a 11. ábrán mutatunk be, a következő abszorpciós maximumokat tartalmazza (nujolban): 3700—3100, 2960—2840 (nujol), 1645, 1590, 1510, 1460 (nujol), 1375 (nujol), 1300, 1230, 1175, 1140, 1060, 1025,970, 890, 840, 813, 720 (nujol);

d) elem-analízis, miután a mintát előzetesen

kb. 140°C-on közömbös atmoszférában szárítottuk (súlyveszteség = 9,8%),

amely a következő közelítő %-os összetételt (átlag) mutatja: szén 56,50; hidrogén 5,10; nitrogén 6,50; klór 3,80%; oxigén (a különbségből) 28,10%;

e) retenciós idő (tß) 25,8 perc inverz fázisú HPLC-vel elemezve, 5 p ZorbaxK ODS oszlop alkalmazásával, és az eluálást 0— 50% lineáris B oldat grádiens mellett — az A oldatban — végezve, 40 perc alatt (A oldat: 9:1 25 mM NaH2P04: acetonitril, 0,1N NaOH-dal pH 6,0-ra pufferolva; B oldat: 3:7 25 mM NaH2PÓ4:acetonitri.l, 0,1N NaOH-dal pH-6,0-ra pufferolva), 2 ml/perc áramlási sebesség mellett) belső standard: 3,5-dihidroxi-toluol, ír

8,84 perc);

f) sóképzésre képes sav-funkció;

g) sóképzésre képes bázis-funkció;

h) molekulásúly kb. 1891, FAB tömegspektrometriával meghatározva.

A teichomycin A2 5 faktor fehér amorf por, amely 210°C-ra melegítve sötétedni kezd és teljesen elmbomlik 250°C-on, és a következő jellemzőkkel rendelkezik:

a) korlátlanul oldható vízben pH 7,0 felett vagy pH 2 alatt, dimetilformamidban, dimetilszulfoxidban és propilénglikolban; gyengén oldható metilcelloszolvban és glicerinben;

7

rosszul oldható metanolban és etanolban; csaknem oldhatatlan kloroformban, benzolban, n-hexánban, acetonitrilben, etiléterben, acetonban, etilacetátban, széntetrakloridban;

b) UV abszorpciós spektruma, amelyet a 12. ábrán mutatunk be, a következő abszorpciós maximumokat tartalmazza:

— 0,1N sósavban:

lambda«,,* 278 nm (Eut. = 49,6)

— pH 7,4 foszfát pufferben: lambda«,,* 278 nm (ET'em — 51,8)

— 0,1N nátriumhidroxidban:

lambda«,,* 297 nm (E\*m — 78,8)

c) IR abszorpciós spektruma nujolban, amelyet a 13. ábrán mutatunk be, a következő megfigyelhető abszorpciós maximumokat tartalmazza: 3700—3100, 2960— 2840 (nujolban), 1645, 1590, 1510, 1460 (nujol), 1375, (nujol), 1300, 1230, 1175, 1145, 1060, 1025, 970, 890, 840, 815, 720 (nujol);

d) elem-analízis, miután a mintát előzetesen kb. 140°C-on közömbös atmoszférában szárítottuk (súlyveszteség = 10,1%), amely a következő közelítő %-os összetételt (átlag) mutatja: szén 56,60; hidrogén 5,05%; nitrogén 6,63%; klór 3,85%; oxigén (a különbség alapján) 27,87%;

e) retenciós idő (t^) 26,4 perc, inverz fá^

zisú HPLC-vel elemezve, 5 p-os Zorbax® ODS oszlopot alkalmazva, az eluálást 0— 50% B oldat lineáris grádiense mellett — A oldatban — végezve, 40 perc alatt (A oldat: 9:1 25 mM NaH2P04:acetonitril,

0,1N NaOH-dal pH 6,0-ra pufferolva; B oldat: 3:7 25 mM NaH2P04:acetonitril, 0,1N NaOH-dal pH 6,0-ra pufferolva), 2 ml/perc áramlási sebesség esetén (belső standard: 3,5-dihidroxi-toluol, t*.

8,84 perc) ;

f) sóképzésre képes sav-funkció;

g) sóképzésre képes bázis-funkció;

h) molekulasúly kb. 1891, FAB tömegspektrometriával meghatározva.

A teichomycin A2 1,2,3,4 és 5 faktor egyaránt tartalmaz egy sóképzésre képes sav-funkciót.

A teichomycin A2 1,2,3,4 és 5 faktor alkálifém-, alkáliföldfém- és gyógyászati szempontból elfogadható ammónium-sóinak előállítása a találmány további tárgyát képezi.

Jellegzetes alkálifém- és alkáliföldfém-só pl. a nátrium-, kálium-, lítium-, kalcium- és magnéziumsó. Az ammóniumsók ammonium- és primer, szekunder vagy tercier-(1—4 szénatomos)-alkilammóníum- és hidroxi-(l—4 szénatomos)-alkilammónium sókat jelentenek.

Az alkáli- és alkáliföldfémsókat a fémsók előállítására általában alkalmazott szokásos eljárások szerint állítjuk elő. Például: a teichomycin A2 1,2,3,4 vagy 5 faktort, szabad sav alakban, megfelelő oldószerben, pl. propilénglikolban oldjuk és a kapott oldat8

5

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65