193538. lajstromszámú szabadalom • Eljárás teichomycin A2 tiszta 1,2,3,4 és 5 faktorok elkülönítésére

193538

1.7— 2,3 (m),2,7—4,0 (m), 4,0—4,7 (m),

4.8— 5,8 (m), 6,2—8,1 (m);

g) sóképzésre képes sav-íunkció;

h) sóképzésre alkalmas bázis-funkció;

i) molekulasúly kb. 1875, tömegspektrum-elemzéssel, ionforrásként gyors atom-bombázást alkalmazva (FAB). (A FAB tömegspektrometria tárgyalására vonatkozóan 1. pl.: M. Barber et al., Nature 293, No. 5830, p. 270—275, 1981).

A teichomycin A2 2 faktor fehér amorf por,

amely 210°C-ra felmelegítve sötétedni kezd és

250°C-on teljesen elbomlik; jellemzői a következők:

a) korlátlanul oldható vízben pH 7,0 felett vagy 2 alatt; dimetilformamidban, dime-, tilszulfoxidban és propilénglikolban; gyengén oldható metilcelloszolvban és glicerinben; rosszul oldható kloroformban, benzolban, n-hexánban, acetonitrilben, etiléterben, acetonban, etilacetátban, széntetrakloridban;

b) UV abszorpciós spektruma, amelyet a 4. ábrán mutatunk be, a következő abszorpciós maximumokat tartalmazza:

— 0,1N sósavban:

lambda,TM* 278 nm (E= 48)

— pH 7,4 foszfát-pufferben: lambda,TM* 278 nm (E{?m = 49,0)

— 0,1N nátriumhidroxidban: lambda,TM* 297 nm (Ef& = 70,0)

c) ÍR abszorpciós spektruma nujolban — amelyet az 5. ábrán mutatunk be — a következő megfigyelhető abszorpciós maximumokat tartalmazza: 3700—3100, 2960— 2860 (nujol), 1645, 1590, 1510, 1460 (nujol), 1375 (nujol), 1300, 1260, 1230, 1180, 1150, 1060, 1025, 970, 890, 845, 815, 720 (nujol);

d) elem-analízis, miután a mintát előzetesen kb. 140°C-on közömbös atmoszférában (súlycsökkenés = 9,8%) szárítottuk, amely a következő közelítő százalékos összetételt (átlag) mutatja: szén 56,15%; hidrogén 5,15%; nitrogén 6,30%; klór 3,90%; oxigén (a különbség alapján) 28,50%;

e) retenciós idő (U) 22,6 pépe, inverz fázisú HPLC-vel elemezve, 5 p Zorbax® ODS oszlop alkalmazásával, mimellett az eluálást a B oldat 0—50% lineáris grádiense mellett az A oldatban, 40 perc alatt végezzük (A oldat: 9:1 25 mM NaH2P04 : acetonitril, 0,1 N NaOH-dal pH 6,0-ra pufferolva; B oldat: 25 mM NaH2P04: acetonitril 3:7 elegy, 0,1N NaOH-dal pH 6,0-ra pufferolva), 2 ml/perc áramlási sebesség mellett (belső standard: 3,5 - dihidroxi - toluol, ír

8,84 perc) ;

f) a következő jel-csoportok 270 Hz-n, 'H NMR spektrumban (a teljes spektrumot a 6. ábrán mutatjuk be), amelyet DMSO-d6-ban vettünk fel, néhány csepp D20 hozzáadásával) koncentráció 25 mg/0,5 ml) (TMS mint belső standard, delta =

.5

-- 0,00 ppm): 0,7—1,5 (m), 1,8—2,2-(m), 2,7—4,5 (m), 4,6—5,7 (m), 6,2—8,1 (m);

g) sóképzésre alkalmas sav-funkció;

h) sóképzésre alkalmas bázis-funkció;

i) molekulasúly kb. 1877, FAB tömegspektrometriával meghatározva.

A teichomycin A2 3 faktor fehér amorf por,

amely melegítés hatására 205°C-on bomlani

kezd és teljesen elbomlik 250°C-on, amely

a következő jellemzőket mutatja:

a) korlátlanul oldható vízben pH 7,0 felett vagy pH 2 alatt, dimetilformamidban, dimetilszulfoxidban és propilénglikolban; gyengén oldható metilcelloszolvban és glicerinben; rosszul oldható metanolban és etanolban; csaknem oldhatatlan kloroformban, benzolban, n-hexánban, acetonitrilben, etiléterben, acetonban, etilacetátban, széntetrakloridban;

b) UV abszorpciós spektruma, amelyet a 7. ábrán mutatunk be, a következő abszorpciós maximumokat tartalmazza:

— 0,1N sósavban:

lambda,TM* 278 nm E'um = 49,2)

— pH 7,4 foszfát pufferben: lambda,TM* 278 nm (E^fm — 50,8)

— 0,1 N nátriumhidroxidban: lambdaTM* 297 nm (E^ = 72,7);

c) IR abszorpciós spektruma nujolban, amelyet a 8. ábrán mutatunk be, a következő megfigyelhető abszorpciós maximumokat tartalmazza: 3700—3100, 2960— 2850 (nujol), 1645, 1590, 1510, 1460 (nujol), 1375 (nujol), 1300, 1230, 1180, 1150, 1120, 1060, 1030, 970, 890, 845, 820, 800, 720 (nujol);

d) elem-analízis, miután a mintát előzetesen kb. 140°C-on szárítottuk, közömbös atmoszférában (súlyveszteség == 12,0%), amely a következő közelítő %-os összetételt (átlagban) mutatja: szén 56,26; hidrogén 5,20; nitrogén 6,69%; klór 3,95%; oxigén (a különbség alapján): 27,90%;

e) retenciós idő ti 23,3 perc, inverz fázisú HPLC-vel elemezve, 5 p-os ZorbaxR ODS oszlop alkalmazásával és az eluálást 0—50% lineáris B oldat grádiens mellett — A oldatban — végezve (A oldat: 9:1 25 mM NaH2P04:acetonitril, 0,1N NaOH-dal pH 6,0-ra pufferolva; B oldat: 3:7 25 mM NaH2P04:acetonitril 0,1N NaOH-dal pH 6,0-ra pufferolva), 2 ml/perc áramlási sebesség mellett (belső standard: 3,5-dihidroxitoluol, ír 8,84 perc);

f) a következő jel-csoportok 270 MHz-en, ‘H NMR-spektrumban (a teljes . spektrumot a 9. ábrán mutatjuk be), amelyet DMSO-d5-ban vettünk fel, néhány csepp D20 hozzáadásával (koncentráció: 25 mg/ /0,5 ml) (TMS mint belső standard, delta = 0,00 ppm): 0,7—1,5 (m), 1,8— 2,0 (m), 2,7—4,5 (m), 4,6—5,7 (m), 6,2—8,0 (m);

g) sóképzésre képes sav-funkció;

h) sóképzésre képes bázis-funkció;

6

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

4