193528. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A-21978C ciklusos peptid-acil-származékok előállítására
193528 Azokat az NTrP,Nom-diacilszármazékokat, melyekben az Nírp-acilcsoport természetes A-21978C faktor megfelelő csoportjából származik, a (8) általános képlet mutatja be. (1) általános képletü vegyületeket előnyösen az „aktív észter" eljárással állítunk elő. A (3) általános képletű vegyület, ahol R° = t-BOC, azaz az A-21978C Nom-t-BOC mag vagy „tBOC mag" különösen előnyös kiindulási anyag az (1) általános képletű vegyületek előállításához. A kívánt N-alkanoil-aminosav vagy N-alkanoil-aminosav (5 ál talános képlet) 2,4,5-triklór-íenil-észtere a leginkább előnyben részesített acilező reagens. E módszer szerint feles mennyiségű aktív észtert reagáltatunk a t-BOC maggal szobahőmérsékleten, közömbös szerves oldószerben, mint DMF-ban, THF-ban, dietil-éterben vagy diklór-metáfíban. A reakcióidő nem kritikus, bár előnyös a mintegy 15-18 órás időtartam. A reakciót végrehajtva az oldószert eltávolítjuk és a maradékot tisztítjuk. Különösen hasznos tisztító eljárás az oszlop-kromatográfia, stacioner fázisként szilikagélt és oldószerrendszerként etil-acetát/metanol (3:2, vol per vol) elegyet használva. A t-BOC csoport trifluor-ecetsav/anizol/trietil-szilán, vagy előnyösen trifluor-ecetsav/l,2-etán-ditiol keverék segítségével távolítható el szobahőmérsékleten, mintegy 3-5 perc alatt. Az oldószer lepárlása után a maradék fordított fázisú HPLC-vel tisztítható. Az N-alkanoil-aminosavak vagy N-alkenoil-aminosavak 2,4,5-triklór-fenil-észtereit célszerűen úgy állítjuk elő, hogy a kívánt aminosavat (5 általános képlet) 2,4,5-triklór-fenollal kezeljük kapcsoló ragens, mint N,N'-diciklohexil-karbodiimid jelenlétében. Természetesen aminosav-észterek előállítására alkalmas más módszerek is használhatók. Az N-alkanoil-aminosavak vagy N-alkenoil-aminosavak ismert vegyületek, vagy szokványos eljárásokkal előállíthatok a megfelelő aminosavat a kívánt alkanoil- vagy alkenoilcsoporttal acilezve. Alkanoil-aminosavakat előnyösen úgy állítunk elő, hogy a megfelelő aminosavat piridinben oldott alkánsavkloriddal kezeljük. Az alkánsavak vagy alkénsavak, reakcióképes származékaik, a találmány szerinti termékek előállításához használt aminosavak ismert vegyületek, vagy ismert eljárásokkal, vagy ismert eljárások módosításával ismert módon előállíthatok. Ha egy adott aminosav az aminocsoporton kívül acilezhető funkciós csoportot tartalmaz, a szakember számára nyilvánvaló módon az ilyen csoportot meg kell védeni, mielőtt az aminosavat az N-alkanoil- vagy N-alkenoilcsoport kapcsolására használt reagenssel reagáltatnánk. Alkalmas védőcsoport lehet a peptid-szintézisben oldalláncbeli funkciós csoportok megvédésére használatos bármely csoport. Az ilyen csoportok jól ismertek és az adott védőcsoport megválasztása 7 6 és alkalmazásának módja könnyen megtalálható a szakirodalomban (lásd például „Protective Groups in Organic Chemistry", M. Mc- Omie, Ed., Plenum Press, N.Y., 1973). 5 E termékek szintézisére használt bizonyos aminosavak optikailag aktív formájúak lehetnek, és kiindulási anyagként a természetesen előforduló konfiguráció (L-konfigurá- 10 ció) és a D-konfiguráció egyaránt alkalmazható a találmány szerinti termékek előállításához. A találmány szerinti A-21978C ciklusos 15 peptidek baktériumellenes anyagokként használva orálisan vagy parenterálisan alkalmazhatók. A szakember számára érthető, hogy az A-21978C vegyületet szokásosan gyógy - szerészetileg elfogadható hordozóval vagy hí- 20 gítóval együtt alkalmazzuk. Az A-21978C vegyület dózisát számos megfontolás befolyásolja, mint például a kezelendő fertőzés természete és súlyossága. Az alkalmazandó dózis-tartományokat és/vagy dózis-egységeket 25 a szakember előtt ismert módon a MIC (minimális gátló koncentráció) és az ED50 (hatásos dózis 50%-a) érték, a toxicitási adatok, valamint egyéb, például farmakokinetikai tényezők, a beteg (gazdaszervezet) és 3Q a fertőző mikroorganizmus jellegzetességeinek figyelembevételével határozzuk meg. A találmány teljesebb bemutatására szolgálnak az alábbi példák és preparálások. 8 35 40 45 50 1. preparálás A-21978C mag preparálása A. Actinoplanes utahensis fermentációja Ferde agaron Actinoplanes utahensis törzstenyészetet készítünk és tartunk fenn. Ferde agar táptalajként a következők egyikét használjuk: A. táptalaj Alkotórészek Előfőzött zabliszt Élesztő Mennyiség 60,0 g 2,5 g K2HP04 1,0 g Czapek-féle ásványi törzsoldat* 5,0 ml Agár 25,0 g lonmentesített víz 1 literig *A Czapek-féle ásványi törzsoldat összetétele a következő: 55 Alkotórészek Mennyiség FeS04.7H20 (2 ml konc. HCl-ban oldva) 2 g KCI 100 g MgS04.7H20 100 g 60 Ionmentesített víz 1 literig B. táptalaj Alkotórészek Mennyiség 65 Burgonya-dextrin 5,0 g Élesztőkivonat 0,5 g
