193528. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A-21978C ciklusos peptid-acil-származékok előállítására
193528 19 20 Az V. táblázat az általános eljárás sze- portját foglalja össze, de kiindulási anyagokrint előállított A-21978C származékok egy cső- ként A-21978C faktorokat alkalmazunk. V. táblázat Kiin- A-21978C Példa száma R az 1 képletben R1 az 1 képletben dulási faktor Észter /mg/ Faktor /mg/ Termék /mg/ •Î 27. CH3CH2CH/CH3//CH2/6C0-k képlet Ci 100 48 43 0,81 28. ch3ch/ch3//ch2/8co-H c2 100 48 25 0,73 29. ch3ch2ch/ch3//ch2/8co-IT C3 400 1000 413 0,87 30. ch3ch2ch/ch3//ch2/6coh2n/ch2/10-co-Cl 1000 1000 732 0,65 aTLC szilikagélen /Merck/, víz/acetonitril/aeeton /1:2:2/ oldószerrendszert használva 34. példa NTrp- [N-(n-Dekanoi!)-L-fenil-alanil] -A-21978C mag előállítása (19. példa vegyülete) E példa az „aktív észter" eljárással való, üzemi szintű preparálást illusztrálja. A. N-(n-Dekanoil)-L-fenil-alanil-2,4,5-triklór-fenolát előállítása N-(n-Dekanoil)-L-fenil-alanilt (31,9 g, 0,1 mól) és 2,4,5-triklór-fenolt (19,7 g, 0,lmól) 1 liter vízmentes éterben oldunk és az oldatot N,N'-diciklohexil-karbodiimiddel (20,6 g, 0,1 mól) kezeljük. A keveréket éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. A kivált N,N'-diciklohexil-karbamidot leszűrjük és eldobjuk. A szűrletet szárazra pároljuk. A kapott maradékot éterrel eldörzsöljük és a szilárd anyagot (maradék ciklohexil-karbamid) szűréssel eltávolítjuk. A szűrletet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot acetonitrilből kristályosítva 36,9 g kristályos N- (n-dekanoil) -L-fen il-a! anil-2,4,5-triklór-fenolátot kapunk; olvadáspont: 122—124°C. B. Nírp- [N-(n-Dekanoil-(L-fenil-alanil-Nom-t-BOC-A-21978C mag előállítása ' N- (n-Dekanoil) -L-fenil-alanil-2,4,5-triklór-fenolátot (10 g, 0,02 mól) és Nom-t-BOC-A-21978C magot (10 g, 6 millimól) vízmentes DMF-ban (1 liter) oldunk és az oldatot szobahőmérsékleten, nitrogénatmoszféra alatt 96 óráig keverjük. Az oldószert csökkentett nyomáson lepároljuk. A maradékot dietil-éter/kloroform eleggyel (800 ml + -(-200 ml) 2 óráig keverjük. A terméket szűréssel elkülönítve világosbarna port (10,3 g) kapunk. Az anyagot (9,9 g) metanolban (200 ml) oldjuk és preparatív HPLC-vel tisztítjuk, „Prep LC/System 500" egységet és stacioner fázisként Prep Pak-500/Clg oszlopot használva. Az oszlopot izokratikusan eluáljuk víz/metanol/acetonitril (2:1:2) elegygyel, és 250 ml-es frakciókat gyűjtünk 1 frakció/min sebességgel. A kívánt vegyület a 9-22. frakcióban eluálódik. A frakciókat TLC alapján egyesítjük [fordított fázisú szilikagél/C18; víz/metanol/acetonitril (3:3:4) eleggyel kifejlesztve, Van Urk permetező reagenssel detektálva). Az egye-12 sített frakciókat bioautográfia segítségével vizsgálva [szilikagél TLC, acetonitril/aceton/ 20 /víz (2:2:1) oldószerrendszer és Micrococcus luteus detektáló mikroorganizmus] megállapítható, hogy egyetlen bioaktív komponenst tartalmaznak. Az eljárással 6,02 g Nkr^-[N-(n-dekanoil)-L-fenil-alanil]-N»,„-t-BOC-A - 25 -21978C magot kapunk [i általános képletű vegyület: R = N-(n-dekanoil-L-fenil-alanil) ; R1 = t-BOC). C. Nírp- [N-(n-Dekanoil)-L-fenil-alanil] -A--2I978C mag előállítása 30 Lombikot (100 ml) jeges fürdőben 5°C-ra lehűtünk. A lombikba bemérünk NírP[N-(n-dekanoil)-L-fenil-alanil]-Nom-t-BOC-A-21978C magot (6,02 g, 8 millimól, a B. fejezetben leírtak szerint előállítva), majd 35 2% anizolt tartalmazó vízmentes trifluor-ecetsavat (50 ml). A keveréket — mely mintegy 2 perc alatt oldattá alakul — nitrogénatmoszféra alatt 10 percig keverjük. Az oldatot csökkentett nyomáson 40°C-on száraz- 40 ra párolva gumiszerű szilárd anyagot kapunk, melyet dietil-éter/diklór-metán (4:1) eleggyel 2x100 ml) eldörzsölünk. A szilárd anyagot szűréssel összegyűjtve és dietil-éterrel mosva trifluor-ecetsavas sót kapunk. Az utóbbit víz- 45 ben (50 ml) oldjuk és az oldat pH-ját piridinnel 5,4-re állítjuk be. Ezután az oldatot liofilizálva 6,1 g sárgásfehér anyagot kapunk. A liofilizált anyagot metanolban (35 ml) oldjuk és fordított fázisú szilikagél/C,8 osz- 50 lopon (Waters Associates, Prep 500) tisz- 1 ítjuk, 0,1% piridinium-acetátot tartalmazó lépcsőzetes gradienssel [H20/CH30H/CH3CN, 3:1:2; 2:1:2 és 1:2:2 arány] eluáljuk és 250 mles frakciókat gyűjtünk. A kívánt termék a 55 2:1:2 arányú eleggyel eluálódik. A terméket tartalmazó frakciókat liofilizálva 2,23 g krémszínű Nírp- [N- (n-dekanoil) - L-feni 1 - a lanil ] -A-21978C magot kapunk () általános képletű vegyület: R = N-(n-dekanoil)-L-fenil-ala- 60 nil; ïr = H). A terméket analitikai HPLC-vel [fordított fázisú szilikagél/C18 oszlop, MeOH/ /CH3CN/H20/PiÖAc (15:39:49:1) oldószer és 230 nm-nél ÚV detektálás], TLC-vel [fordított fázisú szilikagél/C|8 lemezek (What- 65 man), H20/Me0H/CH3CN (3:3:4) oldószer,
