193528. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A-21978C ciklusos peptid-acil-származékok előállítására
193528 1-33. példa A (1) általános képlett! A-21978C komplex N-alkanoil-aminosav-származékait az alábbi általános módszerrel állítjuk elő, a magot az „aktív észter" eljárással acilezve. 5 Nom-t-BOC-blokkolt-A-21978C magot (t-BOC mag) DMF-ban oldunk és az oldatot a megfelelő N-alkanoil-aminosav 2,4,5- -triklór-fenil-észterével („aktív észter") kezeljük. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten, nit- 10 rogénatmoszféra alatt mintegy 18-24 óráig keverjük, majd csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékhoz kevés metanolt adunk; a metanolban nem oldódott szilárd anyagot (N,N-diciklohexil-karbamid) szű- 15 réssel eltávolítjuk és eldobjuk. A szűrletet vákuumban bepárolva nyers Nom-t-BOC-NTrp-acil-A-21978C analógból álló szilárd anyagot kapunk. Ezt az analógot preparatív HPLC- vel tisztítjuk, „Prep LC/System 500" egysé- 20 get (Waters Associates, Inc., Milford, MA) és stacioner fázisként Prep Pak-500/Clg oszlopot (Waterd Associates) használva. Az oszlopot izokratikusan eluáljuk 0,1% piridinium-acetátot tartalmazó víz/metanol/acetonitril 25 (2:1:2) oldószerrendszerrel és mintegy 40 frakciót gyűjtünk, percenként 250 ml-es frakciót eluálva. A felvitt minta mennyisége körülbelül 1-5 g között változik. A nem reagált kiindulási anyagot tartalmazó, korai frakció-XIX. táblázat 17 kát elöntjük. A kívánt termék mindig a legnagyobb csúcsot adja (UV detektort használva), amely a korai frakciók után következik. Az egyedi frakciókat TLC [fordított fázisú szilikagél/C,8, víz/metanol/acetonitril (3:3:4) eleggyel kifejlesztve, Van Urk-permetező reagenssel detektálva] és bioautográfiáselemzés [szilikagél TLC lemezek (Merck), acetonitril/aceton/víz (2:2:1) oldőszerrendszer és Micrococcus luteus kísérleti organizmus] alapján egyesítjük. A fenti eljárással egyedi komponensként kapott Norn-t-BOC-NTrP-acil-A-21978C-an a lógót liofilizáljuk és 0°C-on 2% anizolt tartalmazó vízmentes trifluor-ecetsavval (10 ml per 0,3-0,5 g analóg) kezeljük. Mintegy 5 perc múlva a reakciókeveréket csökkentett nyomáron szárazra pároljuk. A maradékot kevés éterrel eldörzsöljük. A szilárd csapadékot öszrzegyűjtjük és levegőn megszárítjuk. Az anyagot vízben oldjuk; az oldat pH-ját piridin hozzáadása útján mintegy 6-7-ig növeljük, majd az oldatot liofilizáljuk. A kapott termék egyetlen komponensből áll, melyet kromatográfiás tulajdonságai és aminosav-analízise alapján jellemzőnk. A III. táblázat a fenti eljárással előállított NTrp-alkanoil-amino-acil-A-21978C származékok egy csoportját összegzi. 18 Példa száma----------1 általános képletű Termék3 R a? 1 képletben vegyület Észter A-21978C t-BOC-A-21978C /mg/ nag /mg/ Tenn^k /mg/^ Termék /mg/ Rf t. /D/CH 3/CH2/1d CONHCH/CH2 C 6 H 5 /CO-900 7 900d 556 436 0,82 2. CH3/CH2/ioCONH/CH2/„-CO-900 900d 489 485 0,65 3. CH3/CH2/1oCONH/CH2/10-CO-600 900d 326 242 0,83 4. g képlet 416 1000e — 195 0,34 5. h képlet 900 900d 352 263 0,57 6. i képlet 800 800d 76 24 0,23 7. j képlet 800 800d 389 312 0,17 8. /L/CH3/CH2/10CONHCH/CH2C6H5/CO-800 800d 421 324 0,82 9. k képlet 1000 1000 — 230 0,68 10. 1 képlet 900 900d 633 485 0,74 11. m képlet 800 800d 245 186 0,58 12. n képlet 350 700d 376 304 0,38 13. 0 képlet 900 900d 320 218 0,65 14. CH3/CH2/5CONH/CH2/10-CO-900 900d 503 428 0,60 15. p képlet 900 900d 273 212 0,83 16, q képlet 1000 1000d 426 286 0,73 17. /L/CH3/CH2/6CONHCH/CH2C6H5/CO-800 800d 444 343 0,48 18. /L/CH3/CH2/7C0NHCH/CH2C6H5/C0-800 800d 412 312 0,50 19. /L/CH3/CH2/8C0NHCH/CH2C6Hs/C0-800 800d 519 453 0,52 20. /L/CH3/CH2/9CONHCH/CH2C6H5/CO-800 800d 371 287 0,53 3 R1 ' “ H> b Norn-t-BOC~NTrp_acil_ma8* c , Vekcmyreteg-kromatografia szilikagél en /Merck/, viz/acetonítril/aceton /1:2:2/ oldószerrendszert használva d Norn"t_BOC~maS’ e A■21978C mag.
