193505. lajstromszámú szabadalom • Eljárás rákellenes 2-amino-4-hidroxi-kinazolin-származékok előállítására

-glutaminsavat (CB 3716) és az N-[4-{N- [ (2-amino-4-hidroxi-6-kinazolinil) - metil] - -prop-2-iníl-amino)-benzoil] -L-glutaminsavat (CB 3717) a megfelelő, az 1. és 2. példa szerint előállított diészterekből állítjuk elő úgy, hogy 20 ml/mmól 25%-os vizes etanolban szuszpendáljuk, és 4 mólekvivalens 1 n nátrium-hidroxiddal reagáltatjuk. Élénken rázva a szuszpenziót 5 percen belül oldatot kapunk. 1 óra eltelte után az oldatot „Hyflo“ rétegen szűrjük és az oldat pH-ját n vizes sósavval

4,1 értékre állítjuk. Kocsonyás csapadékot kapunk, melyet úgy tisztítunk meg a szervetlen ionoktól, hogy háromszor szuszpendáljuk vízben, centrifugáljuk és dekantáljuk. Az amorf, piszkosfehér higroszkópos szilárd anyagot 100°C-on vákuumban szárítjuk. Az anyag vékonyrétegen kromatografálva egységes két oldószerelegyben is: (i) n-butanol:ecetsav:víz = 5:2:3; (ii) kloroform:metanokecetsav = 75:20:5.

A szerkezeteket elemi analízissel és UV spekroszkópiás módszerrel bizonyítottuk (a spektrumot 0.1 n vizes nátrium-hidroxid oldatban vettük fel). A hozam, olvadáspont és az UV adatok a következők:

CB 3716: hozam: 46%; olvadáspont 207—9°C; UVX(nm) (e) maximumok: 311,5(29,100), 276(17,600), 228,5(49,300);

minimumok: 282(16,900), 252 (9,060).

CB 3717: hozam: 81%; olvadáspont 232—5°C; UVX(nm) (e) maximumok: 301,5(26,600), 279(23,900), 229(50,700);

minimumok: 284(23,700), 251,5 (9,800).

Gyógyászati felhasználásra a CB 3717 dinátriumsójából 10 mg/ml koncentrációjú oldat készíthető 8,5 és 9,0 közötti pH-tartományban 0,9 vegyes fiziológiás %-os nátrium-klorid oldatban.

Az 1. és 3. példában kapott vegyületek olvadáspontját Kofler blokkon határoztuk meg, és korrigáltak, a folát analógok elemi analízis értékét katalitikus adalék és oxigén donor alkalmazásával határoztuk meg. Minden vegyületre kielégítő analízis értéket kaptunk (±0,4%) szénre, hidrogénre és nitrogénre. Az NMR spktrumot Perkin-Elmer R12B 60 MHz-es készüléken vettük fel, kivéve az 1. példa termékeit, melyek spektrumát 50°C-on Bruker HFX 90 MHZ-es Fourier transzformátoros készüléken vettük fel. A preparatív nagynyomású folyadékkromatográfiát Jobin-Yvon Chromatospac Prep 10 készülékkel kovasavgélen (Merck Art 11695) végeztük, az elutum egy Cecil 212A változtatható hullámhosszú ultraibolya monitoron haladt keresztül. A vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatokat Polygram PG 23 előregyártott kovasavgél lemezeken (Macherey-Nagel and Co.) végeztük. A centrifugálás 20.000 gnál történt.

9

4. példa

a) 6,436 g dietil-N-[4-{N-[(2-amino-4- -hidroxi-6-kinazolinil) -metil] -prop-2-inil-ami* noj-benzoil]-L-glutamátot 130 ml vízben szuszpendálunk és 36,19 ml (3,00 mólekvivalens) 0,1 n vizes nátrium-hidroxid-oldattal reagáltatjuk. Az elegyet 45 percen át nagyon élénken rázzuk, és egy oldatot kapunk. A kevés oldatlan anyagot 3-as zsugorított üvegszűrőn kiszűrjük. A nátrium-hidroxid hozzáadásától számított 6 óra elteltével 13,00 ml 0,1 n vizes sósavoldatot adunk a reakcióelegyhez, melynek pH-ja 8,45 lesz. A kevés kicsapódott anyagot tartalmazó oldatot fagyasztással szárítjuk, és N- [4-{N- [(2-amino-4-hidroxi-6-kinazolinil)-metil] -prop-2-inil-amino)-benzoil] -L-glutaminsav dinátriumsójának és nátrium-kloridnak az elegyét kapjuk pelyhes, krémszínű por alakjában. A nagynyomású folyadékkromatográfiás analízis azt mutatja, hogy a szerves anyag 99%-a N-[4-{N-[(2-amino-4-hidroxi-6-kinazolinil) -metil] -prop-2-inil-aminoj-benzoil]-L-glutaminsav (CB 3717).

b) Egy másik eljárás szerint 14,0 g dietil-észtert 400 ml víz, 68 ml etanol és 78,7 ml, 0,1 n vizes nátrium-hidroxiddal keverjük.

1 óra elteltével az oldatot szűrjük és 0,1 n vizes hidrogén-klorid oldattal pH 8,35-re semlegesítjük. Az elegyet fagyasztással szárítjuk, és 15,5 g krémszínű szilárd anyagot kapunk. Mivel a keverék meglehetősen higroszkópos, a mikroanalízis elvégzése előtt hagyjuk, hogy a levegőből az egyensúlynak megfelelő nedvességet felvegye. C24H2lN606Na2 + 1,31 NaCl + 0,51 HC1 + + 2,5 H20 = C24H26i 5iN5Og)5Na3 ^tC^ ^ 82 képletre

10

számított: C:

43,56;

H: 4,03; N

10,58;

Cl:

9,75; Na

11,50; H20:

6,81%;

talált: C:

43,41;

H: 4,03; N:

10,91,

Cl:

8,68; Na

11,53; H20:

7,69%;

tokát kaptunk egy külön analizált tisztított minta vizsgálatakor, mely minta száraz 24 óra hosszat állt levegőn. Talált értékek: Cl: 9,48; H20: 7,12%. A nagynyomású folyadékkromatográfiás vizsgálat szerint ebben a mintában a szerves anyag 98%-át képezte a CB 3717.

5. példa

1 mólekvivalens 2-amino-6-bróm-metil-4- -hidroxi-kinazolin-hidrobromid, 1 mólekvivalens kalcium-karbonát és 1 mólekvivalens dietil-N- [4- (fenacil-amino) -benzoil] -L-glutamát 5 ml/mmól N,N-dimetil-acetamidban készült elegyét 60 óra hosszat keverjük szobahőmérsékleten, majd szűrjük, és az oldószert vákuumban ledesztilláljuk. A keletkező olajat kovasavgélen végzett kromatografálással tisztítjuk, eluálószerként 5% metanolt tartalmazó diklór-metánt használunk. A termék dietil-N- [4-{N- ( (2-amino-4-hidroxi-6- -kinazolil)-metil] -fenacil-aminoj-benzoil] -L-glutamát (CB 3744) 148—150°C-on olvad

193505

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

6