193505. lajstromszámú szabadalom • Eljárás rákellenes 2-amino-4-hidroxi-kinazolin-származékok előállítására

193505

A 10-helyzetű allil- vagy propargilcsoport jelenléte a propilcsoporthoz képest 3- és 30-szoros TS gátlást eredményez, míg a DHFR gátlás kb. ugyanolyan nagyságrendű marad. A CB 3717 által mutatott TS gátlás kompetitívnek bizonyult az N5, Nl0-metilén-tetrahidrofoláttal szemben, és a Ki érték megközelítőleg 1.1 nM.

Sejttenyészet

L1210 és L1210:R71 sejteket folyamatos szuszpenziós tenyészetben RPMI 1640 táptalajba tenyésztünk, amely 10% lószérumot (Flow Laboratories, Irvine, Scotland, UK) tartalmaz. A sejteket 105/ml koncentrációra hígítjuk, és a hozzáadás (táptalajjal hígít-23

va, és Millipoie szűréssel sterilizálva) mindig inkubálás előtt történik. A sejteket 24 és 48 óra eltelte után egy javított Neubauer haemocytométerrel számoljuk. Az ID50-t úgy 5 definiáljuk, mint az a gyógyszerkoncentráció, amely 48 óra alatt a sejtszámot a kontroll értékének felére csökkenti.

Sejttenyészetben az L1210-re és az L1210: :R71 -re (MTX rezisztens) vonatkozó ID50 10 koncentrációk a 2. táblázatban láthatók. Nemcsak a vegyületek toxicitása nőtt meg a 10- -helyzetű szubsztituens telítetlenségének növekedésével, hanem az L1210:R71 keresztrezisztenciájának a mértéke is csökkent. Az L1210: 15 :R71 kb. hatszázszorosan rezisztens MTX-szel szemben.

24

2. táblázat

Vegyület IDj.q ®r1:ékek //um/ Kereszt-rezisztencia

L1210 L1210:R71 IDCOL1210:R71/ID-„L1210

50 ____50______

összehasonlításhoz

használt vegyület*

33.0

315

10

CB 3716

8.3

100

11

CB 3717

o

«

m

14

3

x A CB 3716 és 3717 vegyületeknek megfelelő származék, amelyben R = propilcsoport.

A CB 3717 vegyület toxicitásának megsemmisítése timidinnel (10pM) történő koinkubálással megvalósítható, de csak részleges megsemmisítés érhető el legfeljebb 100 pM-ig terjedő bármilyen folinsav mennyiséggel. Ezeket az eredményeket az 1. ábra mutatja, amely az L1210 sejtek 20 pM CB 3717-től való védelmét mutatja tenyészetben.

• CB 3717 egyedül; OCB 3717 + folinsav

5pM;

□ CB 3717 + 50pM folinsav; BCB 3717+

+ 500 pM folinsav;

ACB 3717+1 pM TdR; ACB 3717 + TopM

TdR

Ezek az eredmények jelzik, hogy a CB 3717 elsősorban a TS-re hat, különösen mivel a DHFR iránti affinitása tízszer kisebb,

40

m nt a TS iránti affinitása, és mivel valóban te’jes védelmet lehet biztosítani az L1210 sejteknek, ha a táptalajhoz timidint adunk, míg a folinsav nem szünteti meg a szer hatását Ät- még nagy koncentráció (100 pM) esetében sem.

A más példák szerint készült vegyületeket is megvizsgáltuk in vitrö, mint TS és sejtnövekedés inhibitorokat, a következő eredménye- 50 két kaptuk: (ezekben a kísérletekben alkalmazott TS-t több, mint 2.000-szeresen tisztítottuk az L1210 sejtektől kromatográfiás módszerrel). [Mégha ezek a vegyületek nem is mutatnak különösen jó TS gátlást, mint 55 rákellenes szerek potenciálisan érdekesek, mivel szövettenyészetben toxicitást mutatnak az L1210 sejtekkel szemben].

13