193381. lajstromszámú szabadalom • Eljárás adenozin-3',5',-ciklofoszfát tartalom radioimmunológiai meghatározására és az ehhez alkalmazott radioligand előállítására
Az (Ib) képletű vegyület szintézisében a reakcióidő az egyéb reakciókörülményektől függően négy és tíz óra közötti, előnyösen hat óra. Az (la) képletű kiindulási anyagot előnyösen feloldjuk dimetil-formamidban (DMF) úgy, hogy annak 0,3 vegyes százalékos — oldott súly/oldó térfogatarány kifejezése %-ban — oldatát kapjuk, ehhez töltünk a tercier amin 10 tf%-os DMF oldatából 3 tf%-nyi mennyiséget és a klór-hangyasav-etilészter — 2—2,5 tf%-os — DMF oldatából 3—4 mólnyi, előnyösen 3,5 mólnyi mennyiséget; az elegyet ezután jól elkeverjük, előnyösen kb. 0°C hőmérsékleten mintegy 15 percen át. Ezután adjuk hozzá az ugyancsak DMF-ben oldott (IV) képletű kiindulási anyagot 2—2,5 mólnyi mennyiségben. Az előnyösen hat óra tartamú reakció közben — már az elegy előzetes kevertetésétől kezdődően — inert reakciótér (vízmentesség) fenntartását biztosítjuk, pl. argongáz áramoltatással és az elegyet a reakció teljes tartamára kevertetjük. A reakció lezajlása után az oldószert ledesztilláljuk. Ezt a műveletet célszerűen a köztitermékek előállításának egyes műveleteinél is alkalmazandó vákuumhídon végezzük, mintegy 40°C hőmérsékleten és 0,00133 bar (1 mmHg) nyomáson, cseppfolyós nitrogénnel hűtött lombikba. A maradékot feloldjuk és kromatografáljuk. Az oldószer előnyösen etil-alkohol, a kromatografáláshoz előnyösen műanyagfóliás cellulóz réteget és három komponens, n-butanohecetsav.víz 12:3:5 térvogatarányú elegyét alkalmazzuk, amely elegy felső fázisában kromatografáljuk a reakcióterméket. A terméket radiokromatográfiás módszerrel azonosítjuk (pl. Berthold LB 2001 Dünnschicht Scannerrel), a rétegről a terméket leoldjuk (pl. a már megadott háromkomponensű elegygyel), majd az oldószert ledesztilláljuk, előnyösen 40°C körüli hőmérsékleten, 0,02 bar (15 mmHg) körüli nyomáson. A kapott termék, amelynek moláris aktivitása — a köztitermék triciálására alkalmazott módszertől függően — meghaladja a 70, illetve a 110 Ci/mmólt, biztosítja a radioimmunassay hatékonyságát. A (IV) képletű tirozinszármazék kiindulási anyagot úgy állíthatjuk elő, hogy (V) képletű 3,5-dibróm-L-tirozin-metilésztert triciálunk poláros oldószerben, katalizátor jelenlétében, csökkentett — pl. 0,933 bar (700 mmHg) — nyomáson. Célszerűen alumínium - oxid hordozóra felvitt palládium katalizátort alkalmazunk, oldószerként pedig DMF és dioxán 1:5—1:20, előnyösen 1:8 térfogatarányú elegyét. Reagensként hordozómentes triciumgázt alkalmazunk. A katalizátort szűréssel választjuk le, a szűrletből az oldószert — pl. a már említett vákuumhíd alkalmazásával,0,00133 bar (1 mmHg) nyomáson — ledesztilláljuk, a maradékot pedig csökkentett nyomáson foszfor-pentoxidon szárítjuk. 5 4 A szilárd maradékot kromatografáljuk és radiokromatográfiás módszerrel azonosítjuk, az (Ib) képletű célterméknél alkalmazott utókezeléshez hasonlóan. A találmány igen lényeges előnye, hogy az (la) képletű célterméket — és természetesen az annak további konvertálásával kapott (Ib) képletű célterméket is — úgy nyerjük, hogy inaktív (nem-jelzett) c-AMP-t reagáltatunk olyan triciált kiindulási anyaggal, amely már triciált állapotban tartalmazza a szintézis során a c-AMP oldalláncába beépülő csoportot. Az A Folyamatábrán jól látható, hogy előbb az oldallánc triciálandó elemeit tartalmazó vegyületet triciálunk, és az így kapott köztitermékből tovább visszük a triciált csoportot. Az (la) céltermék szintézisében alkalmazott (II) képletű — triciált — borostyánkősavanhidrid kiindulási anyagot ugyancsak már triciált (VI) képletű [2,3-H2] -borostyánkősavból állíthatjuk elő. Az acetil-klorid 3—5, előnyösen 4 mólarányú alkalmazásával foganatosított reakció hőmérséklete 80—150, előnyösen 110°C, a reakcióidő 1 —10, előnyösen 3 perc. A termékről az oldószert ledesztillaljuk. A (VI) képletű triciált borostyánkősavat előállíthatjuk egy lépésben (VII) képletű acetilén-dikarbonsav triciálásával (a-változat) és két lépésben (IX) képletű acetilén-dikarbonsav-dimetilészter triciálásával és a kapott (VIII) képletű [2,3-3H2]-borostyánkősav-dimetilészter redukálásával (b-változat). Az a-változat szerint kapott (VI) képletű a-köztitermék moláris aktivitása 30 és 50 Ci/ /mmól közötti, a kétlépéses b-változat szerint kapott (VI) képletű b-köztiterméké 70 és 80 Ci/mmól közötti. A nagyobb hatékonyságú b-köztitermék viszont kisebb összkitermeléssel állítható elő, mint az egy lépésben kapott a-köztitermék. a-változat (VII) képletű acetilén-dikarbonsavat hordozómentes triciumgázzal reagáltatunk palládium katalizátor jelenlétében, csökkentett — 0,866 bar (650 mmHg) körüli — nyomáson. Oldószerként 2,0 vegyes százalékos dioxánt alkalmazhatunk, katalizátorként 5%-os csontszenes palládiumot. A reakció lezajlása után a katalizátort kiszűrjük, a szűrletet csökkentett — előnyösen 0,00133 bar (1 mmHg) — nyomáson bepároljuk, a maradékot — ugyancsak csökkentett nyomáson — foszfor-pentoxidon szárítjuk, b-változat A (IX) képletű acetilén-dikarbonsav-dimetilészter kiindulási anyagot is hordozómentes triciumgázzal reagálhatjuk. A reakciókörülmények megegyeznek az a-változat szerintiekkel azzal az eltéréssel, hogy az oldószer célszerűen 0,67 vegyes százalékos dioxán. A katalizátor kiszűrése után a szűrletet vízzel — mintegy tízszeresére — hígítjuk és ioncserélő gyantával szobahőmérséklet feletti, előnyösen 40°C körüli hőmérsék-6 193381 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
