193373. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ciklusos 9'-tiapeptid-ergotalkaloidok előállítására
1 193373 A találmány tárgya eljárás az (I) általános képletű, ciklusos 9’-tiapeptid - ergotalkaloidoknak szabad bázis formájában vagy savaddíciós sóikként való előállítására. Az (I) általános képletben R, metilcsoportot és R2 izobutil- vagy benzilcsoportot jelent, vagy R, etilcsoportot és R2 benzilcsoportot jelent, vagy Rt izopropilcsoportot és R2 izopropil-, szék. butil-, izobutil- vagy benzilcsoportot jelent. Az (1) általános képletű vegyületek két izomervegyület, úgy mint a 8R és a 8S konfigurációjú vegyület formájában fordulnak elő. Előnyösek a 8R konfigurációjú (1) általános képletű vegyületek. A találmány szerinti módon úgy nyerjük az (1) általános képletű vegyületeket és savaddíciós sóikat, hogy a megfelelő 9’-metilénvegyületet termelő törzs folyékony táptalajú tenyészetéhez L-tiazolidin-4-karbonsavat vagy ennek a savnak a sóját adjuk, és az így kapott vegyületeket kívánt esetben savaddíciós sóikká alakítjuk át. A találmány szerinti eljárást a következőképp hajthatjuk végre: Az (I) általános képletű vegyületek 9’-metilénszármazékait termelő törzsekként a Claviceps purpurea törzseket használhatjuk, valamint olyanokat, amelyeket a Claviceps purpurea kiindulási törzsből besugárzással vagy mutagén anyagokkal való kezeléssel végzett mutációval vagy szelektálással nyerhetünk. A 9’-tia-ergotamin és a 9’-tia-ergotaminin előállítására ergotamin/ergotaminint termelő törzsként például előnyös a Claviceps purpurea NRRL 12043 jelű mutánsát alkalmaznunk. Ebből a törzsből egy tenyészetet az United States Department of Agriculture-nél //Northern Regional Research Center/ Peoria, Illinois állam, Amerikai Egyesült Államok/ NRRL 12043 számon, 1979. szeptember 20-án letétbe helyeztünk. A 9’-tia-ergokrisztin és a 9’-tia-ergokrisztinin előállítására előnyös ergokrisztin/ergokrisztinint termelő törzsként például a Claviceps purpurea NRRL 12044 jelű mutánsát alkalmaznunk. Ebből a törzsből egy tenyészetet a fenti helyen, NRRL 12044 számon, 1979. szeptember 20-án letétbe helyeztünk. A többi (I) általános képletű vegyület előállítására használható törzsek ismertek, és a nyilvánosság rendelkezésére állnak. Az NRRL 12043 és 12044 jelű törzsek fermentációs nyerése és jellemzőik a./ Az NRRL 12043 jelű törzs jellemzői A kiindulási gombatörzset Bromus im Wallisban (Svájc) talált ergotamint tartalmazó szklerociumból különítettük el. Ultraibolya sugárzást és vegyszereket felhasználó több mutagén kezelés után nyertük a találmány szerint alkalmazott NRRL 12043 jelű törzset, amit a következőképp jellemezhetünk: Az NRRL 12043 jelű törzs kis micéliumdarabkáját agarlemez közepére oltjuk, a táptalaj összetétele a következőkben megadott: 60 g szacharóz, 10 g aszparagin, 0,5 g Casamino-savak (Difco), 0,25 g kálium-dihidrogén-foszfát, 0,25 g magnézium-szulfát-heptahidrát, 0,125 g kálium-klorid, 16 mg vas-szulfát-heptahidrát, 10 mg cink-szulfát-heptahidrát, 15 g agar és desztillált víz ad 1 liter. A pH-t 25%-os ammóniaoldattal 6,0-ra állítjuk. A táptalajt 20 percig 120°C-on sterilizáljuk. 24°C-os hőmérsékleten, 7 nap múlva a tenyészet mintegy 3 cm, 14 nap múlva körülbelül 5 cm és 20 nap múlva körülbelül 8 cm átmérőjű. A tenyészet kerek és enyhén begyürődött, a széle diffúz. A tenyészet színe a központban piszkos ibolya, a szélén piszkos szürke. A 20 napos tenyészet emsénként körülbelül százmillió csírát tartalmaz. A csírák oválisak, méretük 6—12 x 4—7 p. b./ Az NRRL 12044 jelű törzs jellemzői A kiindulási gombatörzset Roggenben, Észak-Amerikában talált ergokrisztint tartalmazó szklerociumból különítettük el. Ultraibolya sugárzást és vegyszereket felhasználó több mutagén kezelés után nyertük a találmány szerint alkalmazott NRRL 12044 jelű törzset, amit a következőképp jellemezhetünk: Az NRRL 12044 jelű törzs kis micéliumdarabkáját agarlemez közepére oltjuk, a táptalaj összetétele a következőkben megadott: 70 g malátaextraktum (Wander), 30 g burgonya (Stocki, Knorr), 15 g agar és desztillált víz ad 1 liter. A pH érték 5,3—5,7. A táptalajt 20 percig 120°C-on sterilizáljuk. 24°C-os hőmérsékleten, 7 nap múlva a tenyészet mintegy 2 cm, 14 nap múlva körülbelül 4 cm és 20 nap múlva körülbelül 5 cm átmérőjű. A micélium sekélyen lekerekített; fehér, a légtérbe nyúló vattaszerű hifafonadékkal van befedve, a központban mintegy 1 cm átmérőjű kráterformájú kidudorodással. Ebből sugárirányú ráncok indulnak ki. Az agaron tenyésztett micélium ibolya színű. A tenyészetben erősebb és gyengébb elszíneződésű koncentrikus gyűrűk vannak. A tenyészet széle diffúz. A 20 napos tenyészet emsénként körülbelül százmillió csírát tartalmaz. Méreteikben erősen szórnak (5—12 x 3 x 7 p); többnyire azonban 5—6 x 3 p méretűek. A micéliumban nincs alkaloida. Szaporítás és az oltóanyag előállítása a./ NRRL 12043 Az NRRL 12043 törzs szaporítását és az oltóanyag előállítását úgy végezhetjük el, hogy a fent leírt tenyészet csíráit steril vízben felszuszpendáljuk, és ezzel a ferdecsöves agart beoltjuk, a táptalaj összetétele: 70 g malátaextraktum (Wander), 30 g burgonya (Stocki, Knorr), 15 g agar és desztillált víz ad 1 liter. A pH érték 5,3—5,7. A táptalajt 20 percig 120°C-on sterilizáljuk. 14 nap múlva egy ilyen ferdecsöves agartenyészet körülbelül egymilliárd csirát tartalmaz (12 ml 2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
