193294. lajstromszámú szabadalom • Kérődzők emésztését előnyösen befolyásoló készítmény
15 193294 5 táblázat A Hh-GYOKI-2-14Ab (KmR) törzzsel kezelt állat bendőflórájának változása Az állat 310 ml, összesen 7,lxl05 baktériumot tartalmazó tenyészetet kapott, orális adagolással. 16 Sej tszám/ml Minta Antibiotikum nélkül 250 jug/ml Kanamicin B jelenlétében Adagolás előtt : 4,3 x 10e 1,4 X 10* Adagolás után: 1. nap 4,1 f 10 6 1 ,8 y 10* 2. nap 3,2 x 106 2,1 v 10 3 3. nap 8 x 105 1 ,1 X 103 6. nap 9,1 y 106 7,1 X 102-8. nap 8 x 106 8,1 y 10* 15. nap 6,8 x 10 6 8,7 X 10 4 22. nap 5 X 106 9,8 * 101 29. nap 8 Y 106 1,1 y 10* 36. nap 9,1 V 10s 7 y io* 43. nap 7 y io4 7,9 y103 60. nap 6,1 y io4 tr\ o >< A táblázatból világosan kiderül, hogy az adagolt mikroorganizmus hosszú időn át jelen van a bendőben és osztódik. 3. példa Melasszal etetett állat bendőflórájának befolyásolása A. ) Melaszon növekedni képes mikroorganiz- 40 mus izolálása Az 1. példa A. pontjában megadottakat ismételjük meg, azzal a különbséggel, hogy a kiindulási mintát melasszal etetett állat bendőjéből vesszük, az egyedi izolátumokat olyan 45 RGCF jelű táptalajra oltjuk, amely szénakivonat helyett glükózt tartalmaz, a folyékony táptalajon kinőtt tenyészeteket RGCA jelű táptalajon szélesztjük és ilyen táptalajra oltjuk a melaszt hasznosítani képes sejtekből 50 kifejlődött telepeket. így bendőből származó olyan mikroorganizmusokhoz jutunk, amelyek a melaszt metabolizálni képesek. B. ) Melaszt hasznosító baktériumok genetikai 55 jelölése Az 1. példa B. pontjában megadottakat ismételjük meg, azzal a különbséggel, hogy az 1. példa A. pontjában megadottak szerint kapott mikroorganizmusok helyett a 3. példa 60 A. pontja szerint előállított sejteket transzformáljuk a plOll plazmid DNS-sel. A Km* sejtek közül néhánynak a kanamicin B-vel szembeni rezisztenciáját a 6. táblázatban adjuk meg. 6. táblázat A bendőbaktériumok és a genetikailag jelzett, melaszt bontó törzsek kanamicin B érzékenysége Mikroorganizmus Bendőtartalom Kiindulási törzsek Genetikailag jelzett KmR törzsek Hh-GYOKI-3-2 -14 -34-81 Me -132 Legkisebb növekedésgátló koncentráció Kanamicin B, pg/ml 31 7,5 250 500 250 500 500 A fentiek szerint eljárva melaszt hasznosító, kanamicin B-re nagymértékben rezisztens izolátumokhoz jutunk. A Hh-GYOKI-3-81Me jelű törzset MNG 00289 sorszámon letétbe helyeztük az Országos Közegészségügyi Intézetnél a Mikroorganizmusok Nemzeti Gyűjteményében. C) A genetikailag jelzett sejtek visszajuttatása a bendőbe Az 1. példa C. pontjában megadottak szerint járunk el, azzal a különbséggel, hogy a Hh-GYOKI-3-81Me jelű törzzsel 1,8% cellulóz helyett 1,8% glükózt tartalmazó RGCFa jelű 9
