193237. lajstromszámú szabadalom • Eljárás poliéter tipusú antibiotikumok előállítására
193237 Komponens Mennyiség, CaC03 0,2 g/liter desztillált víz CoC12-6H20 1,0 Oldható keményítő 10,0 Sag 4130 habzásgátló 0,1 Kazein 1,0 (Union Carbide) K2 HP04 0,5 MgS04 (vízmentes) 0,5 Agár 20.0 A pH-t autoklávozás előtt 7,4-re állítjuk be. A ferde táptalajt az X-14889 tenyészetével beoltjuk és 28°C-on 10-14 napon át inkubáljuk. A ferde agar-tenyészetből levett kacsnyi menynyiségű, spórázó tenyészetet tartalmazó agart használunk fel 500 ml-es Erlenmeyer-lombikban levő 100 ml, alábbi összetételű sterilezett inokulum táptalaj beoltására. Komponens Soylose 105 Cerelose CaC03 CoC136H20 Na2S04 Mennyiség, g/liter csapvíz 10,0 20,0 0,2 0,001 1,0 A pH-t sterilezés előtt 6,0 értékre állítjuk be. Az ihokulált lombikot 28°C-on 72 órán át forgó rázatógépen inkubáljuk, percenkénti 250 fordulat és 2,54 cm lökethossz mellett. A kapott tenyészet 3 ml-es részletével [3 térfogat %] inokulálunk 500 ml-es Erlenmeyer-lombikban levő 100 ml sterilezett, az inokulum táptalajjal azonos összetételű táptalajt. Az inokulált lombikot forgó rázatógépen 28°C-on 6 napon át inkubáljuk (250 fordulat/perc, 2,54 cm lökethossz). 2. példa Streptomyces X-14889 tank fermentációja Az X-14889 tenyészetet az 1. példában leírt keményítő-kazein ferde agar táptalajon tenyésztjük és tartjuk fenn. Az agar-tenyészetből vett spórázott tenyészetet tartalmazó agar kacsnyi mennyiségét használjuk fel 6 literes Erlenmeyer-lombikban levő 2 liter, alábbi öszszetételű táptalaj beoltására. Mennyiség g/liter csapvíz 10,0 20,0 0,2 0,001 1,0 Komponens Soylose 105 Cerelose CaC03 CoC12.6H20 Na2S04 A pH-t az autoklávban történő 45 perces sterilezés előtt 6,0 értékre állítjuk be. Az inokulált lombikot 28°C-on 5 napon át forgó rázatógépen inkubáljuk (250 fordulat/ /perc, lökethossza: 2,54 cm) . A kapott tenyészet 4 literes mennyiségét használjuk fel 378,53 literes fermentorban levő 227,12 liter alábbi összetételű táptalaj beoltására: Komponens Soylose 105 Cerelose 10 15 20 25 30 35 40 Mennyiség, g/liter csapvíz 10,0 20,0 45 50 55 60 65 A pH-t a gőzzel (1,0555 kg/cm2) 45 percen át végzett fermentáció előtt 6,0 értékre állítjuk be. Az inokulált táptalajt sűrített levegővel levegőztetjük (1,46 liter/sec), és 280 fordulat/ /perc sebességgel keverjük. A fermentációt 28°C-on 72 órán át végezzük. A kapott tenyészet 75,7 liternyi mennyiségét használjuk fel 1892,65 literes fermentorban levő 1362,7 liter, alábbi összetételű táptalaj beoltásához: Komponens Soylose 105 Cerelose CaC03 CoC12.6H20 Na5S04 Sag 4130 habzásgátló (Union Carbide) Mennyiség, g/liter csapvíz 10,0 20,0 0,2 0,001 1,0 0,1 A pH-t 1,0555 kg/cm2 gőzzel történő sterilezés előtt 6,0 értékre állítjuk be. Az inokulált fermentort sűrített levegővel (9,44 liter/perc) levegőztetjük és 280 fordulat/perc sebességgel keverjük. A fermentációt 28°C-on 139 órán át végezzük. 3. példa X-14889A antibiotikum izolálása a Streptomyces X-14889 törzs tenyészetével végzett tank fermentáció során nyert fermentléből A Streptomyces sp. X-14889 tenyészet 139 órás fermentációja után kapott teljes fermentlevet (1368 liter) a fermentáció befejezésekor mért pH-értéken (7,1) azonos térfogatú etil-acetáttal kétszer extraháljuk. Az oldószeres réteget elválasztjuk és vákuumban bepároljuk. A visszamaradó olajat n-hexánban oldjuk és azonos térfogatú acetonitrillel kétszer ext-'aháljuk. Az extrahált hexános fázist vákuumban bepároljuk. A visszamaradó olajat (70 g) 1,5 liter metilén-kloridban oldjuk és egymásután 0,5 liter 1 n sósavval, vízzel, telített nátrium-karbonát-oldattal és vízzel mossuk. Az oldószeres réteget nátrium-szulfát felett szárítjuk és vákuumban bepároljuk. A koncentrátumot metilén-kloridban szuszpendált 800 g szilikagéllel (Davison fok 62) töltött oszlopon kromatografáljuk. Az oszlopot 4 liter metilén-kloriddal, majd 4 liter 9:1 arányú dietiléter-hexán eleggyel extraháljuk. 40 ml-es frakciókat szedünk le, a 60-120. sz. frakciókat összegyűjtjük és vákuumban bepároljuk. A visszamaradó olajat (6 g) minimális mennyiségű metilén-kloridban oldjuk és metilén-kloridban szuszpendált 300 g szilikagéllel (Davison fok 62) töltött oszlopon kromatografáljuk. Az oszlopot 2 liter metilén-kloriddal, majd 4 liter 7:3:1:0,02 arányú dietiléter/n-hexán/aceton / ammónium-hidroxid elegy és 4 liter 9:1 arányú dietiléter-ace-5
