193213. lajstromszámú szabadalom • Eljárás AAD 216 antibiotikum-komplex és fő komponensei előállítására kibdelosporangium aridum-mal történő fermentálássla
A találmány tárgya eljárás vankomicin-tí-' pusú új antibiotikumok előállítására, valamint eljárás a hatóanyagként egy vagy több fenti antibiotikumot tartalmazó gyógyszerkészítmény, illetve állati takarmánykeverék előállítására. A találmány szerinti eljárás értelmében az új antibiotikumot egy új baktériumtörzszsel, a Kibdelosporangium aridum gén. nov., sp. nov. SKandF - AAD 216-tal (ATCC 39323) fermentáljuk. A találmány tárgya közelebbről eljárás a továbbiakban AAD 216 komplexnek nevezett antibiotikum előállítására, oly módon, hogy a K. aridumot asszimilálható nitrogén- és szénforrást tartalmazó vizes táptalajban tenyésztjük,merített tenyészetben, aerob körülmények között, míg a fenti mikroorganizmus jelentős mennyiségű AAD 216 komplexet termel, és az AAD 216 komplexet kívánt esetben kinyerjük a fermentléből. Az AAD 216 komplexből kromatográfiás eljárással végzett elválasztással és izolálással előállíthatjuk a komplexet alkotó egyes biológiailag aktív új vegyületeket, az AAD 216A-t, AAD 216B-t és AAD 216C-t is. Az AAD 216 antibiotikum-komplexet, és biológiailag aktív fő komponensei, az AAD 216A, AAD 216B és AAD 216C is antibakteriális hatással rendelkeznek. Az AAD 216 komplexet, és az AAD 216A-1, AAD 216B-t és AAD 216C-t az állatgyógyászatban is használhatjuk, növekedést serkentő szerként, továbbá a szarvasmarha-masztitisz kezelésére. Az új antibiotikumot, az AAD 216 komplexet és biológiailag aktív fő komponenseit, az AAD 216A-t, AAD 216B-t és AAD 216C-t egy új mikroorganizmus, a Kibdelosporangium aridum gén. nov., sp. nov. SKandF-AAD 216 fermentálásával állítjuk elő. A fenti mikroorganizmust egy arizonai, Pimá County-beli sivatagos területről begyűjtött talajmintából izoláltuk. A biológiailag tiszta mikroorganizmus tenyészetét az American Type Culture Collectionnál (Rockville, Maryland, Amerikai Egyesült Államok) helyeztük letétbe, a törzs letéti száma ATCC 39323. AAD 216 komplex alatt a K. aridum fermentálásával előállított antibiotikum-elegyet értjük. Szakemberek számára érthető módon az AAD 216 komplexben lévő egyes antibiotikum-komponensek aránya a fermentálási művelet körülményeitől függően változik. A fermentléből az AAD 216 komplexet úgy nyerhetjük ki, hogy a fermentlevet szűrjük, majd a nyers ÁAD 216 komplexet 0-l0°C-on hidrogén-kloriddal pH 3 értékre savanyítva kicsapjuk a szűrletből. A csapadékot ezután vízben oldjuk, a pH 6-8 érték beállításával, majd gyantaoszlopra visszük, ahonnan vizes metanollal eluáljuk. Az eluátumot liofilizáljuk, az így nyert AAD 216 komplexet kromatográfiás eljárással tisztítva dúsított AAD 216 komplexet kapunk. A dúsított AAD 216 komplex általában 40-85 sú)y%-ban tartalmazza az AAD 216A, AAD 216B és AAD 216C elegyét. 1 2 A dúsított AAD 216 komplex — amely analitikai nagynyomású folyadékkromatográfiás meghatározás szerint 29 súty% AAD 216Á-t, 10 súly% AAD 216B-t és 10 súly% AAD 216C-t tartalmaz — pH 6 körüli értéken az alábbi tulajdonságokkal rendelkezik: a) halvány fehéres-sárgás szilárd anyag, amely 300-350°C-on bomlik; b) közelítő elemi összetétele: 53,22% szén, 6,14% hidrogén, 3,73% nitrogén és 0,28% hamu; c) KBr-ban felvett infravörös spektruma: vmax (cm-1): 3400, 2920, 1660, 1600, 1510, 1460, 1430, 1390, 1320, 1240, 1150, 1060 és 1020; d) acetonitril-víz 1:1 arányú elegyben felvett ultraibolya spektruma semleges és savas körülmények között 280 nm-nél mutat abszorpciós csúcsot, E1?g=43',9; bázikus körülmények között az abszorpciós csúcs 301 nm-nél van, £,*=56,8; e) perjodáttal pozitív, ninhidrinnel negatív próbát ad; f) vízben, metanolban, dimetil-szulfoxidban és dimetil-formaminban oldódik, etanolban, acetonitrilben, acetonban, dietil-éterben és alifás szénhidrogénekben nem oldódik. Az egyes tiszta antibiotikum-komponenseket, az AAD 216A-t, AAD 216B-t és AAD 2l6C-t preparatív nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással izolálhatjuk az AAD 216 komplexből. Közelebbről, az AAD 216 komplexet lépcsőzetes gradiens-elűciós módszerrel kromatografáljuk, az eluálást 20—28% acetonitrilt tartalmazó 0,1 n foszfát-pufferrel (pH 6) végezzük. Az analitikai nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással kiválasztot megfelelő frakciókat egyesítjük, gyantaoszlopon sómentesítjük és liofilizáljuk. Tiszta AAD 216A, AAD 216B és AAD 216C antibiotikum-komponenseket kapunk a fenti műveletekkel. A tiszta AAD 216A pH 6 körüli értéken az alábbi tulajdonságokkal rendelkezik: a) halvány sárgás-fehér szilárd anyag, 300- 350°C-on bomlik; b) összegképlete C8|H82N8O30Cl4; c) közelítő elemi összetétele: 48,20% szén, 5,01% hidrogén, 5,21% nitrogén, 6,43% klór, ként és szerves foszfort nem tartalmaz, a víztartalom 10,80%; d) KBr-ban felvett infravörös spektruma: Vmax (cm'1): 3400, 2920, 1660, 1600, 1510, 1460, 1430, 1390, 1320, 1300, 1240, 1150, 1060 és 1020; e) tömegspektruma gyors atomokkal való bombázás mellett (FAB) 1787 (főcsoport) (M+H); f) acetonitril-víz 1:1 arányú elegyében felvett ultraibolya spektruma neutrális és savas körülmények között 280 nm-nél mutat abszorpciós csúcsot, E,^ =51; bázikus kö.rülmények között az abszorpciós csúcs 301 nm-nél van, E,*, = 73; 2 193213 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 50 65
