193104. lajstromszámú szabadalom • Eljárás N-alfa-(9-fluorenil-metil-oxi-karbonil)-aminosavak és pentafluor-fenil észterük előállítására
193104 A diciklohexil-karbodiimides reakciónál szerves oldószerként éter típusú oldószereket, például tetrahidrofuránt, dioxánt, halogénezett szénhidrogéneket, például kloroformot, diklór-metánt, alkilezett savamidokat, például dimetil-formamidot vagy 1-4 szénatomos alkánsavak 1-4 szénatomos alkilésztereit, így etil-acetátot használhatunk. Találmányunk további részleteit a kiviteli példák szemléltetik a találmány korlátozásának szándéka nélkül. Az aminosavak és származékaik jelölésére használt rövidítések az IUPAC-IUB javaslatának megfelelnek (Biochem. J. 219, 345. (1984)]. Az olvadáspont-meghatározások dr. Tottoli-féle készülékben (Büchi, Svájc) történtek. A fajlagos optikai forgatóképesség mérésére Perkin Elmer 141 számkijelzésű fotoelektromos polarimétert használtunk. A termékek tisztaságát — esetenként — kontrollvegyületekkel összehasonlítva előregyártott kovasavgél adszorbensen (DC-Fertigplatten, Merck) vizsgáltuk. Az Fmoc-aminosavakat etil-acetát: (piridin:ecetsav:víz=20:6:11) = =9:1, a pentafluor-fenil-észtereket kloroform:metanol:ecetsav=80:10:1 térfogatarányú oldószerelegyben kromatografáljuk. A kromatogramokat először UV-fényben 256 nm-nél tesszük láthatóvá, majd klórozást követően kálium-jodid — tolidin reagenssel hívjuk elő. 1. példa (9-Fluorenil-metil)-(pentafluor-fenil ^karbonát (II) 103,5 g (0,4 mol) 9-fluorenil-metil-oxi-karbonil-klorid és 73,6 g (0,4 mol) pentafluor-íenol 1,0 1 vízmentes éterben készült oldatát 0°C- ra hűtjük, majd keverés közben hozzácsöpögtetünk 56,0 ml (0,4 mól) trietil-amint. A reakcióelegyet 2 órán át keverjük 0°C-on, majd háromszor 200 ml vízzel mossuk. A szerves fázist vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk, és csontszénnel derítjük. Az étert vákuumban lepároljuk, a kristályos maradékot 500 ml n-hexánból átkristályosítjuk. így 139,7 g (86%) Fmoc-OPfp-t kapunk. Olvadáspontja: 83-84°C; fy=0,80 (etil-acetátban kromatografálva). 2 2. példa N*-(9-Fluorenil-metil-oxi-karbonil)-L-alanin 0,29 g (3,3 mmol) L-alanin és 0,59 g (7,0 mmol) nátrium-hidrogén-karbonát 10 ml víz és 15 ml aceton elegyében készült szuszpenziójához szobahőmérsékleten keverés közben hozzáadunk 1,22 g (3,0 mmol) Fmoc-OPfp-t. A reakcióelegyet egy éjszakán át keverjük. Másnap vékonyrétegkromatogramon ellenőrizzük a reagens eltűnését, majd az elegy^ 18%-os sósavoldattal pH=2-re savanyítjuk, és háromszor 20 ml etil-acetáttal extraháljuk. A szerves fázist 20 ml 1 mol/1 koncentrációjú sósav-oldattal és 20 ml vízzel mossuk, vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk, majd 3 vákuumban 3 ml térfogatig töményítjük. A maradékhoz zavarosodásig n-hexánt adunk, majd az elegyet hűtőszekrénybe tesszük. Másnap a kivált kristályos anyagot kiszűrjük, és n-hexánnal mossuk. Így 0,42 g (93,3%) Fmoc-Ala-OH-t kapunk; olvadáspontja 141-142°C; [a]i5=-18,5° (c=l,0; öimetil formamid) ; R/=0,5. A fentiek szerint eljárva állítjuk elő az 1. táblázatban megadott további (I) általános képletű, adott esetben további védőcsoportot is hordozó Fmoc-aminosavakat. 3. példa N‘-(9-Fluorenil-metií-oxi-kaiboniI)-L-alanin-(pentaf luor-fenil ) -észter A 2. példában leírt mennyiségekkel elkészítjük az Fmoc-Ala-OH-t. A reakcióelegy földöt gozása során kapott etil-acetátos oldatot, amely Fmoc-Ala-OH-t és pentafluor-fenolt tartalmaz, 0°C-ra hütjük, majd keverés közben hozzáadunk 0,64 g (3,1 mmol) diciklohexil-karbodiimidet. A reakcióelegyet 2 órán keresztül jeges fürdőben keverjük, majd a ki vált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük, a szürletet vákuumban 3 ml térfogatig töményítjiik. A maradékhoz zavarosodásig n-hexánt adunk, majd az elegyet hűtőszekrényben kristályosítjuk. Így 1,08 g (73,9%) Fmoc-Ala-OPfp-t kapunk. Olvadáspontja: 173-175°C; [a]£?= =-22,3° (c=l; kloroform); R/=0,80. A fentiekben megadott módon eljárva állítjuk elő a 2. táblázatban megadott és adott esetben egyéb védőcsoportot is hordozó N*-(9-fluorenil-metil-oxi-karbonil) -aminosav-pentafluor-fenil-észtereket. 1. táblázat: Fmoc-aminosavak kéoói-tése Fmoc-OPfp-vel__ Aminosav Fmoc-aminosav 4 (származék) Hozam, % Olvadáspont °C Alá 93,3 141-142 Gly •84,2 171-172 Leu 94,4 151-152 Ile 83,0 141-142 Val 90,0 143-144 Pro 82,0 114-115 Phe 86,2 181-182 Trp 89,1 163-165 Met 84,2 127-130 Cys(Bzl) 99,0 126-128 Lys(Tos) 91 ,8 134-136 Z-Lys 88,7 86-88 Lys(Z) 81,7 113-114 Asp(0* Bu) 78,2 147-148 Glu(OtBu) 91,0 47-51 Pip 63,7 150-151 Ser 77,8 90-94 Thr 90,0 amorf Tyr 70,2 98-107 As n 82,5 184-185 Gin 91,8 206-208 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
